重叠延伸PCR技术是常规PCR技术的衍生,它依据需要连接的基因中核苷酸序列(或基因片段)设计出多对具有互补末端的引物,先分段对模板进行扩增,再将PCR产物混合,其中的重叠链将相互搭桥、互为模板而延伸,最终实现不同来源的扩增片段重叠拼接起来的目的,如图1所示。请分析并回答下列问题:(1)图1中的过程②在 ___个反应体...
重叠延伸PCR(Overlap Extension PCR)或“SOEing”是一种基于聚合酶链反应的DNA序列重组方法,无需依赖限制位点,可在体外直接产生突变的DNA片段。通过修改加入引物 5′端中的序列,可使任何一对聚合酶链反应产物的一端具有共同的序列。在聚合酶链反应条件下,共同序列可使两个不同片段的链相互杂交,形成重叠。通过DNA聚...
重叠延伸PCR技术是常规PCR技术的衍生,它依据需要连接的基因中核苷酸序列(或基因片段)设计出多对具有互补末端的引物,先分段对模板进行扩增,再将PCR产物混合,其中的重叠链将相互搭桥、互为模板而延伸,最终实现不同来源的扩增片段重叠拼接起来的目的,如下图1所示。请分析并回答下列问题:(1)图1中的过程②在___个反应...
重叠延伸PCR 原理OVERLAP PCR,也称重叠延伸 PCR,是指先将两个想要连在一起的序列记为 A、B,用一对具有互补末端(在原基因上选取使得引物 A2 的 5' 端引物与 B1 的 3' 段引物之间有 20 bp 左右的互补片段)的相反方向引物将原来序列上 P 出重叠互补的片段,再用原来的正常...
播放出现小问题,请 刷新 尝试 0 收藏 分享 0次播放 掌握重叠延伸PCR技术,轻松实现定点突变 逗比胡萝卜 发布时间:2天前还没有任何签名哦 关注 发表评论 发表 相关推荐 自动播放 加载中,请稍后... 设为首页© Baidu 使用百度前必读 意见反馈 京ICP证030173号 京公网安备11000002000001号...
【题目】 重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的基因的方法。该技术在扩增较长片段的DNA、不同来源的DNA片段拼接、基因的定点诱变等方面具有广泛的应用前景。右图是利用重叠延伸PCR技术扩增某目的基因的过程。其主要没计思路是用具有互补配对片段的引物 ...
重叠延伸PCR本质上也是基本的PCR,不过引物不太一样。两片段可以互为引物,甚至可以将重叠延伸PCR的产物理解为“引物二聚体”。 第1步:PCR获得两个(图中AB和CB)或者多个片段,临近两个片段之间须有重叠区(图中红色区域)。产物可以纯化,也可以吸取几μL...
重叠延伸PCR技术是一种通过寡聚核苷酸链之间重叠的部分互相搭桥、互为模板,通过多次PCR扩增,从而获得目的基因的方法。利用该技术可以实现基因的定点诱变。它在需要诱变的位置合成两个带有变异基因碱基的互补引物,然后分别与引物a和引物d做PCR,这样得到的两个PCR引物产物都带有变异基因,并且彼此重叠,再将重叠部位进行重组...
重叠延伸PCR可以实现在DNA两端同时进行定向变异,从而避免在后期回溯过程中的麻烦。 2.2 DNA连接 DNA连接是指将不同组织来源的DNA片段进行连接的技术。重叠延伸PCR在连接过程中,可以通过PCR技术将两个片段的连接点相互重叠,从而实现快速、准确的连接。 三、操作流程 3.1设计引物 首先,需要根据实验需要,设计出两对带有...