MEL1是Gal4酵母双杂交系统的一个报告基因，编码分泌α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色底物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色，即阳性的双杂交作用。X-α-Gal可在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用，利用此底物可以省去双杂交体系中的β-半乳糖苷酶溶...
X-α-Gal是一种酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的显色底物,用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。通过蓝白颜色筛选,快速和简便地识别阳性的蓝色克隆,无需费时的β-半乳糖苷酶报告基因检测。 X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶...
酵母转录因子GAL4由两个结构域组成:DNA结合结构域(BD)和转录激活结构域(AD)。BD能够识别并结合位于GAL4响应基因上游的激活序列(UAS),而AD则可以启动UAS下游基因的转录。只有当BD和AD在空间上充分接近时,GAL4转录因子才具有活性,并能激活下游基因的转录。酵母双杂技术利用这一特性,将AD与X蛋白融合,BD与Y蛋白融合。
两种蛋白的相互作用可导致分裂泛素异二聚体的组装并在蛋白酶解作用下释放转录因子,继而转位人核,从而引起两种报告基因lacZ和HIS3的激活。因此,这种相互作用可直接通过将酵母菌接种在缺乏组氨酸的选择性培养基上生长,再进行X- gal检测β -半乳糖苷酶的表达来确定(见图1)。
英文名:X-α-gal Solution(20mg/ml)储存条件:-20 产品说明: X-α-Gal(5-溴-4-氯-3-吲哚基-α-D-吡喃半乳糖苷)是α-半乳糖苷酶(MEL1)的显色反应底物,更为常见的X-Gal是β-半乳糖苷酶(LacZ)的显色反应底物。α-半乳糖苷酶可水解无色的X-α-Gal底物,并生成蓝色的产物。通过肉眼可见的蓝白斑筛选...
X-α-Gal与酵母双杂交系统: 酵母双杂交筛选是体内用来检测蛋白-蛋白相互作用的一种遗传分析实验,此方法由Prof. Stan Fields及合作者开发用来调查两个已知蛋白的相互作用,另一个重要应用是从文库内筛选并鉴定某一特定蛋白的未知结合蛋白。阳性克隆也就是那些能够激活报告基因转录子,使得营养缺陷型酵母双杂交菌株在营养...
几乎所有酵母杂交的实验中,均使用DMF溶解X-α-gal。X-α-gal也溶解于甲醇和DMSO。经过验证酵母杂交的实验中DMSO可以用于X-α-gal的配制与稀释。但DMSO熔点高,使用不便。甲醇还未经验证。 11.杂交效率不高,怎么办? 效率不高,可能是杂交细胞数量不够,适当增加诱饵蛋白的液体培养量,保证有足够的细胞数量。可以延长...
BD和AD单独分别作用并不能激活转录进行,但是当二者在空间上充分接近时,则呈现完整的GAL4转录因子活性并可激活UAS下游启动子,转录启动子下游基因并使其表达。 在酵母双杂交系统中,BD与X蛋白融合,AD与Y蛋白融合,如果X、Y之间形成蛋白-蛋白复合物,AD与BD会在空间上充分接近,重新构成结构域,启动报告基因序列的转录。
酵母双杂交结构是将待研究的两种蛋白质的基因分别克隆到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域基因，构建成融合表达载体，从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。酵母双杂交结构的建立是基于对真核生物调控转录起始过程的认识。在酵母双杂交结构中，"诱饵"蛋白X克隆至DNA-BD载体中，表达DNA-BD/X...