MEL1是Gal4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌α-半乳糖苷酶。该酶可水解无色的X-α-Gal底物并最终产生蓝色底物。表达α-半乳糖苷酶的酵母菌落在含有X-α-Gal的培养基上显蓝色,即阳性的双杂交作用。X-α-Gal可在培养基上直接检测酵母双杂交相互作用,利用此底物可以省去双杂交体系中的β-半乳糖苷酶溶...
X-α-Gal是一种酵母半乳糖苷酶 (MEL1) 的显色底物,用于在培养基上直接检测GAL4系统的酵母双杂交作用。通过蓝白颜色筛选,快速和简便地识别阳性的蓝色克隆,无需费时的β-半乳糖苷酶报告基因检测。 X-α-Gal检测酵母MEL1基因的激活。MEL1是GAL4酵母双杂交系统的一个报告基因,编码分泌型的α-半乳糖苷酶。该酶...
酵母双杂交,酵母双杂交系统由Fields和Song等首先在研究真核基因转录调控中建立 。典型的真核生物转录因子, 如GAL4、GCN4、等都含有二个不同的结构域: DNA结合结构域(DNA-binding domain)和转录激活结构域(transcription-activating domain)。前者可识别DNA上的特异序列,
因此,这种相互作用可直接通过将酵母菌接种在缺乏组氨酸的选择性培养基上生长,再进行X- gal检测β -半乳糖苷酶的表达来确定(见图1)。 在这里,我们阐述了膜蛋白与可溶性蛋白质或者是两种膜蛋白之间相互作用的在体检测方法。 一个跨膜诱饵蛋白X被融合到一个紧跟Cub结构城相连的人工转录因子之后,从而形成-种蛋白质X ...
在培养基中加入X-α-gal ,这个成分在自然状态下是无色的,但如果诱饵蛋白和猎物蛋白可以结合,组合成一个完整的转录因子后,这个基因会催化X-α-gal发生转化,会将酵母变成蓝色。 ∴经过多筛,能存活,且成蓝色的酵母,里面会有诱饵蛋白和猎物蛋白真正的结合 ...
酵母双杂交系统是将待研究的两种蛋白质分别克隆(融合)到酵母表达质粒的转录激活因子(如GAL4等)的DNA结合结构域(DNA-BD)和转录激活域(AD)上,构建成融合表达载体,从表达产物分析两种蛋白质相互作用的系统。 基本信息 中文名称 酵母双杂交系统 外文名称 Y2H ...
酵母双杂交系统(Yeast two-hybrid assay)是⽤于体内研究蛋⽩相互作⽤的⼀种⾮常便利的⼯具,常⽤的如GAL4为基础的系统,使⽤酵母转录因⼦GAL4来检测转录激活后的蛋⽩相互作⽤。某些转录因⼦(如GAL4)由两个可以分开,功能上相互独⽴的结构域组成,N端有⼀个147个氨基酸组成的DNA结合...
几乎所有酵母杂交的实验中,均使用DMF溶解X-α-gal。X-α-gal也溶解于甲醇和DMSO。经过验证酵母杂交的实验中DMSO可以用于X-α-gal的配制与稀释。但DMSO熔点高,使用不便。甲醇还未经验证。 11.杂交效率不高,怎么办? 效率不高,可能是杂交细胞数量不够,适当增加诱饵蛋白的液体培养量,保证有足够的细胞数量。可以延长...
Fields首先建立了一个双杂交系统,BD与X蛋白融合,AD与Y蛋白融合,如果X、Y之间形成蛋白-蛋白复合物,使GAL4两个结构域重新构成,则会启动特异基因序列的转录. 他们利用Snf1与Snf4的相互作用,将Snf1与BD融合,Snf4与AD融合,构建在穿梭质粒上. 其中Snf1是一种依赖于丝氨酸、苏氨酸的蛋白激酶,Snf4是他的一个结合蛋白....
答9:不可以,X-Gal与X-Alpha-Gal不同。X-Gal是E.coliβ-半乳糖苷酶(LacZ)的反应底物,而X- Alpha -Gal是酵母α-半乳糖苷酶(Mel1p)的反应底物。X-Alpha-Gal在Matchmaker Gold系统中用作蓝白筛选的筛选底物,在蛋白质互作激活mel1基因表达后,酵母细胞可以分泌表达Mel1p。