病毒转染高转染效率(对原代细胞有80-90%)适用于较难转染的细胞系可用于体内转染可用于构建稳定表达或瞬时表达的细胞系被转染的细胞系必须含有病毒受体基因插入大小受限(病毒载体~10 kb,非病毒载体~100 kb)技术难度高,且构建重组蛋白很费时存在生物安全问题(激活潜在疾病,免疫原性反应,细胞毒性,插入突变,使细胞恶性转...
但不同的转染试剂,针对不同细胞系要求转染时的最适细胞密度各不相同,因此使用新的细胞系或者新的转染试剂时,应进行实验优化并建立一个稳定方法,包括适当的接种量和培养时间等等。不同实验目的也会影响转染时的铺板密度,比如研究细胞周期相关基因等表达周期长的基因,就需要较低的铺板密度,所以需要选择能够在较低铺板密...
2)要检测所用的无血清培养基与转染试剂的相容性,已知CD293, SFMII, VP-SFM 与转染试剂不相容。 3)用了含有血清的培养基制备转染复合物。血清会降低复合物的形成。建议用无血清培养基稀释DNA/RNA和转染试剂。 4)DNA或RNA的复合物形成的比例,一般DNA(µg):转染试剂(µL)=1:2~1:3;而RNA(ng):转染试剂...
将不同浓度的阳性对照的siRNA转入靶细胞(同样适合实验靶siRNA),转染48小时后统计对照蛋白或mRNA相对于未转染细胞的降低水平。过多的siRNA将导致细胞毒性以至死亡。 5. 通过标记siRNA来优化实验 荧光标记的siRNA能用来分析siRNA稳定性和转染效率。标记的siRNA还可用作siRNA胞...
2. 转染原理 转染实验的原理主要包括以下几种: (1)脂质体介导的转染:脂质体是一种由磷脂分子组成的微小囊泡,具有生物相容性和靶向性。将外源DNA或RNA分子与脂质体混合,通过脂质体与细胞膜的相互作用,使外源DNA或RNA分子进入细胞内。 (2)聚合物介导的转染:聚合物介导的转染是通过聚合物与细胞膜相互作用,使外源...
实验步骤：将DNA，RNA，siRNA或寡核苷酸和转染试剂分别在不同的管中稀释→将两者混合形成混合物→将形成的混合物加入细胞中，脂质体的正电荷有助于帮助复合物粘附到细胞膜上→复合物经细胞内吞作用进入细胞→检测基因表达或沉默情况。电穿孔法：利用电脉冲可逆地击穿细胞膜形成瞬时的膜上小孔，同时细胞膜上电势升高，...
本实验旨在利用脂质体介导的方法将目的基因转染入HEK293细胞,并观察转染效率及目的基因的表达情况。 二、实验材料 1. 细胞:HEK293细胞 2. 载体:pEGFP-C1(绿色荧光蛋白基因) 3. 试剂:胎牛血清、DMEM培养基、转染试剂(如Lipofectamine 3000)、Trizol试剂、PCR试剂盒、DNA marker等 三、实验方法 1. 细胞培养:将HEK...
转染实验有哪些注意事项呢? 一、细胞转染注意事项 如为贴壁生长细胞,一般要求在转染前一日,必须应用胰酶处理成单细胞悬液,重新接种于培养皿或瓶,转染当日的细胞密度以70-90%(贴壁细胞)或 2×106-4×106细胞/ml(悬浮细胞)为宜,最好在转染前4h换一次新鲜培养液。
稳定转染通常指的是利用病毒载体,将外源基因整合到细胞基因组上,通过筛选得到稳转细胞株,使外源基因成为细胞基因组的一部分而得以复制,能够长期的表达某基因。 用途 通过瞬转与稳转达到基因的敲低与过表达 材料与仪器 以293T细胞为例介绍PEI转染法 实验试剂与器材: ...
转染实验是指将外源性的基因导入到受试细胞内,使其获得新的生物学功能的一种重要的分子生物学实验方法。其基本原理是:1.选取一个适当的载体载体是携带外源基因进入受试细胞的载体。常用的有质粒、病毒载体等。载体需要具备携带基因的能力,同时对细胞也要有一定的亲和力。2.构建重组载体将需转入细胞内的目的基因连接...