一、细胞转染的目的转染目的主要包括基因表达和基因抑制。1. 基因表达:①通过使用质粒载体或mRNA在培养细胞(或动物模型)中表达目的蛋白。②转染最常通过使用质粒载体或mRNA在培养细胞(或动物模型)中表达目的蛋白,利用真核细胞中的蛋白表达可以生成经过适当折叠和翻译后修饰的重组蛋白。另外,将带有可检测的标记物及其他修...
真核细胞转染实验的目的主要是将外源核酸(DNA或RNA)导入真核细胞中,以改变细胞的遗传特性或研究基因表达。具体来说,可以分为基因表达和基因抑制两大方面。一方面,通过使用质粒载体或mRNA在培养细胞中表达目的蛋白,或利用转染技术生成经过适当折叠和翻译后修饰的重组蛋白。另一方面,通过RNA干扰(RNAi)技术抑制特定蛋白质的...
一、实验目的 学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法,观测外源蛋白的表达(绿色荧光蛋白),为染色准备实验材料。 二、实验原理 上图所示是脂质体介导转染的示意图,它显示了外源质粒进入细胞的一般过程。 外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法、磷酸钙法和脂质体...
( 2)设计引物用PCR法从基因组DNA中克隆所需的靶启动子片段,将此片段插入到荧光素酶报告基因质粒(pGL3-basic)中。( 3)筛选阳性克隆,测序。扩增克隆并提纯质粒备用。
因为内参需要的量很少,所以将质粒稀释后转染能够减小误差,这个是没有问题的,不过我们之前都是用无菌的双蒸水稀释的,DEPC水对细胞状态可能还是有一定影响的,其次你转染的时候要保证细胞密度。关于细胞的转染效率的话,在细胞种类和转染试剂固定的情况下,转染效率是一定的,您可以用该转染试剂将一个带荧光标签的质粒转入该...
6. 参数优化:不同细胞系和实验需求可能需要不同的电转参数。通过预实验优化参数,可以在保证高转染效率的同时,保持较高的细胞存活率。 7. 后续培养:电击后的细胞十分脆弱,需要选择合适的培养基和条件进行恢复培养。注意观察细胞生长状态和存活情况,及时调整培养条件。
目的基因在真核系统中的表达及细胞内的定位实验-磷酸钙法瞬时转染法 原理 将氯化钙,DNA和磷酸缓冲液混合,形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒(沉淀)。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。 材料与仪器 真核细胞 HBS CaCl2 TE 质粒DNA ...
6、连续酶解，室温下23℃黑暗中静止酶解3h 7、利用光学显微镜检查原生质体（30-50μm大小）8、在过滤...
摘要目的 观察抑癌基因p53和p16单独或共转染在动物整体中治疗非小细胞肺癌(NSCLC)的效果。方法采用培养细胞移植法,将人NSCLC细胞系A569接种于裸小鼠背部皮下,建立裸小鼠皮下肺癌移植瘤模型。将25只荷瘤裸小鼠随机分成空白对照组、十八酰基胺阳离子(SA)对照组、p53基因组、p16基因组、p53+p16基因组,共5组,每组5只...
成像的话一般荧光显微镜、激光共聚焦显微镜；定量的话一般就是流式细胞仪吧。