1、根据样品重量(1g 样品加入3.5ml 提取液,可根据材料不同适当加入),准 备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4 小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清夜,样品制备完成。 蛋白质提取液:300ml 1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml ...
0-4°C 生理盐水冲洗组织表面血迹,以1:9(即100ug 重量加入900ul 体积)的比例加入蛋白匀浆提取液,0-4 °C 冰水混合物中用1ml 匀浆器制成10%的蛋白匀浆。匀浆在10000G 离心10-15 分钟,取上清备用。 注:蛋白匀浆提取液(PH7.6):Nacl 50 mM Tris 10mM EDTA 1mM, PMSF 1 mM,Na3 VO4 .12H2O 0.5 mM N...
1.在液氮中研磨叶片 2.加入样品体积 3 倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1 小时)弃上清。3.加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1 小时),然后真空干燥沉淀,备用。4.上样前加入裂解液,室温放置30 分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃800...
(1)从新鲜样品中提取总蛋白(简易法) 1、自配裂解液(pH 8.5-9.0):50 mM Tris-HCl,2 mM EDTA, 100 mM NaCl,0.5% Triton X-100,调pH值至8.5-9.0备用;用前加入100 μg/ml 溶菌酶,1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。 2、...
单层贴壁细胞总蛋白的提取 倒掉培养液,并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液(或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走)。 每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS(0.01M pH=7.2～7.3)。平放轻轻摇动1min洗涤细胞,然后弃去洗液。重复...
下面将介绍蛋白质的十种常用提取方法。 1.溶液渗透法:该方法利用溶液渗透作用,通过梯度离心或薄膜渗透,将蛋白质从混合物中分离出来。这种方法适用于体积较小且溶解度高的蛋白质。 2.超声波破碎法:通过使用超声波的机械波作用,使得细胞膜破碎,释放出蛋白质。这种方法操作简单,操作快速,适用于处理小体积的样品。 3....
蛋白提取的第一步是细胞裂解,目的是破坏细胞膜和细胞器膜,从而释放出细胞内的蛋白质。裂解后,通过离心将细胞碎片和细胞器沉淀下来,以便分离蛋白质。离心的速度和时间需要根据细胞裂解程度和蛋白质特性来确定。🔬实验步骤如下: 1️⃣ 取出装有细胞的培养皿,弃去上层清液。 2️⃣ 用PBS清洗两遍,然后将多余...
(一)水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解.提取的温度要视有效成份性质而定.一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间.但另一方面,温度升高会...
提取蛋白的方法 以下是8条关于提取蛋白的方法: 1.沉淀法呀!就像那细沙在水中慢慢沉淀一样。比如说,在做豆腐的时候,不就是通过一些物质让豆浆里的蛋白质沉淀下来嘛!这可是个很常用的法子哟! 2.离心法呢!这不就像把东西使劲甩出去找到我们要的那个部分嘛。你看,提取血液中的某种蛋白就经常用这个办法呀! 3.层析...
组织中总蛋白的提取: 1.将少量组织块置于1～2ml匀浆器中球状部位,用干净的剪刀将组织块尽量剪碎。 2.加400μl单去污剂裂解液裂(含PMSF)于匀浆器中,进行匀浆。然后置于冰上。 3.几分钟后再碾一会儿再置于冰上,要重复碾几次使组织尽量碾碎。 4.裂解30min后,即可用移液器将裂解液移至1.5ml离心管中,然后在...