1、根据样品重量(1g 样品加入3.5ml 提取液,可根据材料不同适当加入),准 备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4 小时)。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清夜,样品制备完成。 蛋白质提取液:300ml 1、1Mtris-HCl(PH8) 45ml ...
1.在液氮中研磨叶片 2.加入样品体积 3 倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1 小时)弃上清。3.加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1 小时),然后真空干燥沉淀,备用。4.上样前加入裂解液,室温放置30 分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃800...
(1)从新鲜样品中提取总蛋白(简易法) 1、自配裂解液(pH 8.5-9.0):50 mM Tris-HCl,2 mM EDTA, 100 mM NaCl,0.5% Triton X-100,调pH值至8.5-9.0备用;用前加入100 μg/ml 溶菌酶,1μl/ml 的蛋白酶抑制剂PMSF。该裂解液用量为10-50ml 裂解液/1g湿菌体。 2、...
Western Blot蛋白样品制备是实验的第一步,也是非常关键的一步,只有蛋白提得质量好,后面Western Blot跑出来的条带结果才美观又可靠。不同的样本,提取蛋白的方法不同,像诸如血浆、消化液和分泌液等体液中可溶性蛋白质,可不经抽提直接进行分离。而胞内蛋白的抽提则需要先将细胞膜或细胞壁破碎,然后用适当溶剂将蛋白质溶...
下面将介绍蛋白质的十种常用提取方法。 1.溶液渗透法:该方法利用溶液渗透作用,通过梯度离心或薄膜渗透,将蛋白质从混合物中分离出来。这种方法适用于体积较小且溶解度高的蛋白质。 2.超声波破碎法:通过使用超声波的机械波作用,使得细胞膜破碎,释放出蛋白质。这种方法操作简单,操作快速,适用于处理小体积的样品。 3....
(一)水溶液提取法稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质稳定性好、溶解度大、是提取蛋白质最常用的溶剂,通常用量是原材料体积的1-5倍,提取时需要均匀的搅拌,以利于蛋白质的溶解.提取的温度要视有效成份性质而定.一方面,多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大,因此,温度高利于溶解,缩短提取时间.但另一方面,温度升高会...
蛋白提取纯化程序 分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分离、精细分离三个步骤。 01 前处理 分离纯化某种蛋白质,首先要把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来并保持原来的天然状态,不丢失生物活性。 为此,动物材料应先剔除结缔组织和脂肪组织,种子材料应...
3️⃣ 准备细胞裂解液:将RIPA强裂解液、蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂按100:1:1的比例混合在5毫升的EP管中。加入抑制剂时,确保枪头伸到液面以下,充分混合。 4️⃣ 在六孔板的每个孔中加入100-200微升的RIPA裂解混合液。加入时,从高处一滴一滴加入,尽量使液体均匀铺平。然后在冰上静置20分钟。 5️...
蛋白提取纯化程序 分离纯化某一特定蛋白质的一般程序可以分为前处理、粗分离、细分离三步。 01前处理 分离纯化某种蛋白质,首先要把蛋白质从原来的组织或细胞中以溶解的状态释放出来并保持原来的天然状态,不丢失生物活性。 为此,动物材料应先剔除结缔组织和脂肪组织,种子材料应先去壳甚至去种皮以免受单宁等物质的污染...
以下是几种常见的蛋白质提取方法: 1. 细胞裂解法: - 使用裂解缓冲液(如RIPA缓冲液)将细胞破裂,释放蛋白质。 - 添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂,以防止蛋白质降解。 - 在低温和高速离心的条件下,去除细胞碎片和细胞核等杂质。 2. 组织研磨法: - 使用液氮或组织研磨器将组织研磨成细碎的粉末。 - 使用裂解...