,也称Western,Western blot、Western blotting、Western印迹,是检测蛋白的重要方法之一。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记...
蛋白免疫印迹(Western Blot,简称WB)是一种能够从细胞或组织提取的复杂蛋白质混合物中检测靶蛋白并对其进行半定量的常用实验技术,还可以鉴定和定量蛋白质中翻译后修饰的氨基酸。与蛋白质科学中其他常用的分析技术(如ELISA、IHC、质谱法和显微镜观察等)相比,WB可提供有关蛋白质分子量信息,区分分子量相近的蛋白,适合检测...
蛋白质印迹法是由瑞士米歇尔弗雷德里希生物研究所(Friedrich Miescher Institute)的Harry Towbin在1979年提出的。在尼尔·伯奈特(Neal Burnette)于1981年所著的《分析生物化学》(Analytical Biochemistry)中首次被称为Western Blot。蛋白免疫印迹(Western Blot)是将电泳分离后的细胞或组织中蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜...
1️⃣ 样本制备:包括蛋白质提取、定量和变性。 2️⃣ SDS-PAGE凝胶电泳:将蛋白质分离。 3️⃣ 转膜:通过电转将蛋白质转移到固相支持物上。 4️⃣ 封闭:用脱脂牛奶或BSA封闭膜上的非特异性位点。 5️⃣ 一抗、二抗孵育:与目标蛋白结合并标记。 6️⃣ ECL化学发光检测:进行显影。 7️...
细胞或组织裂解:使用裂解液(如RIPA裂解液)裂解细胞或组织。可以使用超声破碎或手持式研磨仪,将组织研磨至均匀液体,尽量在冰上进行操作,确保蛋白处于可溶解状态。 强RIPA裂解液:适用于难以裂解的样本,如组织样本或需要提取膜蛋白和核蛋白的情况。 弱RIPA裂解液:适用于提取细胞中的全蛋白,特别是当不希望破坏细胞内部的...
术语"Blotting或印迹"指的是将凝胶中的生物样品转移到膜上,然后在膜表面进行检测。蛋白免疫印迹实验,或Western Blot(又称为免疫印迹,因为使用了抗体来特异性检测其抗原)于1979年由 Towbin 等人提出,现在已是常规的蛋白分析技术。抗体-抗原相互作用的特异性实现了...
蛋白质印迹法也称免疫印迹法,是一种常用的蛋白质检测方法,它通过电泳将目标蛋白从复杂的样品中分离出来,然后将特异性抗体与待测蛋白结合,最后利用免疫染色技术将目标蛋白可视化地显示在固相载体上并进行定量分析。 蛋白质印迹法通常包括以下步骤: 1.提取总蛋白质:首先需要从组织、...
处理方法：使用BCA法、Folin酚法、Bradford法等方法进行样本蛋白浓度检测，保证样本提取成功。原因-2. 样本中不表达目标蛋白：对样本中蛋白表达情况并不是很熟悉，可能需要检测的目标蛋白在样本中根本就没有表达。处理方法：在参考文献或Uniprot/NCBI上查找对应蛋白的组织表达特异性，分析可能的表达量，判断自己样本中的...
蛋白印迹实验(免疫印迹实验)即Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中表达情况的信息。现已广泛应...
蛋白印迹,又称western blotting或(蛋白)免疫印迹,是指将蛋白质从SDS-PAGE电泳凝胶转移到PVDF或硝基纤维素膜上,然后使用带有荧光或化学发光检测的抗体对蛋白质进行免疫检测。 蛋白印迹是细胞和分子生物学的核心技术,主要用于靶标蛋白特异表达分析,蛋白与蛋白或蛋白与DNA相互作用的后续分析,以及抗体活性检测等。