1.除了这些湿实验方法以外,还有干实验的方法策略:像AlphaFold、分子对接等也能让蛋白-蛋白互作结果更可信,因此一般也需要; 2.在这些技术中,有的技术适合筛选靶蛋白(如酵母双杂交Y2H),有的技术适合验证蛋白互作(如邻近连接技术PLA),也有的技术既适合筛选靶蛋白,也适合验证蛋白-蛋白互作(如免疫共沉淀Co-IP+蛋白质谱...
1.原理：通过将生物素连接酶与诱饵蛋白融合表达，使诱饵蛋白附近的蛋白质被生物素化，然后通过亲和纯化富集这些被生物素化的蛋白质。2.应用：用于鉴定诱饵蛋白附近的蛋白质，揭示蛋白-蛋白互作网络。十、蛋白质芯片技术：1.原理：将大量蛋白质固定在芯片表面，然后与待测样品进行反应，通过检测反应结果来判断蛋白质之间...
简单来说,我们假定a蛋白和b蛋白可能存在互作,将纯化的融合GST的a蛋白和纯化的b蛋白以及能特异性结合GST的Sephrose 4B beads混合在一起孵育一定时间,然后洗去未结合的蛋白,煮沸beads进行SDS-PAGE电泳。通过Western blot检测结果,我们可以看到GST-a蛋白和b蛋白所对应的条带,即表明了a蛋白和b蛋白因发生相互作用而被GST...
这些技术作为如今的研究中的常客，其中IP-MS是常用的在植物体内筛选互作蛋白的有效方法，Co-IP则常用于筛选后的蛋白之间的点对点验证，ChIP是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用，常用来检测转录因子结合位点，RIP用来研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术，今天小源将选择IP-MS和Co-IP这两种技术，从原理、实验步骤...
RNA pull-down 作为研究 RNA 与蛋白互作的核心技术,已成为研究焦点,是近年来研究IncRNA、circRNA与蛋白质相互作用的主要手段。其以RNA为主角,研究其与蛋白的互作。 RNA pulldown的原理是使用体外转录与生物素标记RNA,然后与细胞或组织的提取液进行孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物与链霉亲和素磁珠结合,通过磁分...
因此了解与研究蛋白质间的相互作用，是理解细胞内发生若干生物化学活动的第一步。在植物中研究蛋白互作时，大家常用的方法有：双分子荧光互补实验（BiFC）、荧光素酶互补实验（LCA）以及免疫共沉淀（Co-IP）等，那么除了这些常用的技术之外，还有其它的蛋白互作研究方法吗？答案当然是肯定的！在本期的推文中，小远就...
这些物理化学相互作用为蛋白质之间的互作提供了基础。二、分子识别机制分子识别是蛋白质之间相互作用的另一种重要机制。它涉及到两个或多个蛋白质在空间上精确匹配，形成高度特异性的相互作用。分子识别主要依赖于蛋白质表面的特定氨基酸残基，这些残基通过氢键、静电相互作用或范德华力等相互作用形成配体-受体对。例如，...
蛋白互作在细胞生命活动中起着至关重要的作用，并在不同的时空层面上参与多种细胞活动，因此研究蛋白互作对于理解分子调控网络至关重要。而在植物中筛选到潜在的互作蛋白后，大多数情况下，获得表达两种蛋白的稳定转化植株费时又费力。在这种情况下，如果不需要非常严格地在植物体内研究两个蛋白的互作的话，大家可以考虑...
RNA pull-down 作为研究 RNA 与蛋白互作的核心技术,已成为研究焦点,是近年来研究IncRNA、circRNA与蛋白质相互作用的主要手段。其以RNA为主角,研究其与蛋白的互作。 RNA pulldown的原理是使用体外转录与生物素标记RNA,然后与细胞或组织的提取液进行孵育,形成RNA-蛋白质复合物。该复合物与链霉亲和素磁珠结合,通过磁分...