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将要研究的靶点序列（序列可以是mRNA上的，也可以是lncRNA/circRNA的序列）插入到报告载体中，作为荧光素酶基因的3’UTR，与miRNA共同转染工具细胞，如果mir与靶序列互作，则荧光素酶表达量下降（检测的荧光信号下降）。启动子与转录因子作用分析 将要研究的启动子序列构建到报告载体中作为荧光素酶的启动子，同时转染要...
荧光素酶是一种小分子物质,属于费氏弧菌的萤光素酶,被用于评估生物发光细菌发光和耗氧动力学的研究,还用于研究各种发光细菌菌株的深色突变体对活性氧的敏感性。 参考质量标准外观:白色粉末纯度(HPLC) ≥98.0%醋酸根含量≤12.0%水分含量≤8.0%肽含量≥80.0%内毒素≤50EU/mg氨基酸组成分析≤±10% ...
一、什么是荧光素酶和双荧光素酶? 荧光素酶报告基因检测是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成oxyluciferin,在luciferin氧化的过程中,会发出生物荧光(bioluminescence),可通过荧光测定仪设备测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光,常应用...
双荧光素酶应用 1.转录因子调控研究 将目的基因的启动子插入报告基因载体,同时在实验细胞中共转过表达该转录因子,就可以用来检测转录因子对启动子的作用,启动转录越多,那报告基因的表达量就越大,荧光值越高。 2.microRNA同mRNA靶向互作 将待测mRNA的3’UTR序列插入报告基因载体,再共转入该microRNA,如果萤光素酶活...
2. 两种荧光素酶位于同1个载体上: (1)pmirGLO载体 考虑到实验偏差、细胞转染难易程度、细胞承受力等问题,研究人员又进一步对双荧光报告系统的载体进行优化,将两种荧光素酶基因引入同一个载体,以实现偏差小、转染易、细胞死亡率降低的目的。 目前,最常用的是Promega公司研发的pmirGLO载体,以PGK中等强度启动子启动的萤...
荧光素酶(luciferase)是自然界中能够产生生物荧光的酶的总称,其中具有代表性的是从甲虫中分离得到的萤火虫荧光素酶(Firefly luciferase)和从海肾中分离得到的海肾荧光素酶(Renilla luciferase)。由于两种酶底物和发光颜色的区别,且在动物体内无内源性表达,使其在双报告实验中得到广泛应用。
荧光素酶的应用 (一)：pGL3-Basic---用于转录因子结合位点与启动子活性分析。把待分析启动子区段构建到F-Luciferase上游，和转录因子共转染分析F-Luciferase活性即可反应启动子的活性高低。该质粒通常需要结合持续性表达R-Luciferase的载体作为内参以校正不同样品之间转染的转染效率。启动子的作用相当于“基因开关”，...
1. 表达荧光素酶会影响细胞功能吗? 荧光素不会影响动物的正常生理功能。 2. 荧光素酶稳定吗? 哺乳动物生物发光,一般是将荧光素酶基因整合到细胞染色体DNA上以表达荧光素酶,培养出能稳定表达荧光素酶的细胞株,当细胞分裂、转移、分化时,荧光素酶也会得到持续稳定的表达。