流式细胞的具体实验步骤基本是细胞表面标记的检测和细胞内细胞因子的检测两部分。一、细胞表面标记的检测 1.试剂平衡至室温。准备:消毒台面;穿戴工作服,帽子,口罩和手套,放置棉签,草纸和有盖垃圾桶(内装有消毒剂);2.写编号纸并编号;3.每管加相应的抗体10l/每种和50l全血,震荡,室温避光20分钟。加血前摇匀血样;...
流式细胞术实验: 1、制备细胞悬液,计数 2、分装,按照每个EP(1.5ml)管1-2*10 6个细胞分装,3500rpm,4度离心。 3、用100ulPBS重悬,加入10ul大鼠血清封闭,4度避光30min。 4、加入相应的荧光标记的抗体,混匀,避光,4度孵育30min。 5、加入1mlPBS洗两遍。 6、用200ul PBS重悬,经纱布过滤转至流式管,上级...
方法/步骤 1 流式细胞术实验步骤？ 一、流式细胞术检测细胞胞膜分子1. 细胞重悬：细胞处理计数后，用细胞洗液（含2% BSA的PBS）重悬细胞，使细胞浓度为1×107/mL；2. 对照设置：空白对照、同型对照、待测样本每管取100uL上述重悬的细胞，使每管细胞数达到1×106/管；3. 一抗孵育：空白对照管不加...
流式细胞实验步骤具体实验步骤如下: 1、把待用的培养基和PBS提前30min放在37℃预热。 2、取细胞长满的T25瓶两个,先用PBS清洗两遍,然后胰蛋白酶消化,待细胞变圆,吸出消化液,每瓶各加入5ml的完全培养基,把细胞重悬计数,把细胞浓度调到5*105-1*106之间。 3、取30个塑料小皿,每皿铺细胞量为2.5*105个,待...
01样本制备各种来源的样品准备进行流式分析时需制备成单颗粒悬液,以分析活细胞或固定细胞、细胞核、微生物或小颗粒,具体取决于分析目标。拥有或开发一个好的样品制备方案,将为实验成功打下基础。在制备单细胞悬液时,主要的考虑因素是尽量减少细胞死亡和碎片。死细胞导致样品中岀现团块,这些团块往往在免疫染色中粘附游...
第一步设计你的流式细胞实验 很多同学在实验设计的时候就埋下了隐患,最常见的问题就是——对照设置不合理,最后导致整体实验失败或数据不理想。 流式对照至少有 5 种。 生物学对照,空白对照,同型对照(Isotype control),补偿对照(也叫单阳性对照)和 FMO 对照,主...
实验步骤 1.按照实验要求进行细胞铺板,待细胞长到需要的密度收细胞。 2.收细胞步骤和普通处理细胞相同,需要注意的是在做细胞周期时,需要将原培养基收集到离心管内,消化时间到后加入原培养基中止消化,最后一起离心。 3.离心完后去掉上清,加入1ml冰浴的PBS缓冲液重悬,并转移到1.5ml Ep管内,低温离心机4℃、1000g...
样品可以是细胞培养液、组织切片、血液等,具体根据实验需求而定。对于血液样品,需要进行抗凝处理,防止细胞凝结。对于组织切片,需要将其切成小片或粉末状,以便于后续处理。 二、细胞染色 染色是流式细胞检测中的重要步骤,通过染色可以标记细胞表面的抗原或抗体,以便后续的检测和识别。常用的染色方法包括免疫荧光染色、...
流式细胞术实验步骤 以肿瘤细胞为例: 1.将正常生长的对照或处理组肿瘤细胞计数,每组取 2×105-3×105 个细胞铺板,待细胞贴壁后,将正常培养基替换为无血清 1640 培养基,同步化 20 h,使得所有细胞都进入相同的细胞周期时期;同步完后,将培养基重新替换为正常含血清培养基,继...