细胞原代培养、传代培养、冻存和复苏 1实验原理 细胞培养可分为原代培养和传代培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为原代培养;当原代培养的细胞增殖达到一定密度后,则需要做再培养,即将培养的细胞分散后,从一个容器以1:2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养,为传代培养,传代培养的累积次数就是...
在细胞培养中,常见的术语有原代培养、传代培养、冻存和复苏。 原代培养 原代培养是将从组织中分离出的细胞直接进行培养,即首次培养。通常将组织切割成小段或分散成单细胞悬液,加入培养基中,使其中的细胞粘附在培养基表面上生长。原代培养中所得细胞经常受到组织来源、细胞类型和培养条件等因素的影响,因此可能表现出...
细胞培养的具体步骤可分为:细胞复苏、细胞传代、细胞冻存 一、细胞复苏 细胞复苏的原则:快速融化 在复苏细胞时必须遵循快速融化的原则,即必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至 37 ℃,因为这样可使冻存时细胞外的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 细胞复苏操作过程 二、细胞...
贴壁细胞会在培养瓶中长成致密单层(悬浮细胞会充满整个体积的培养液),并铺满培养瓶底部,如果不及时进行分瓶处理,细胞将会逐渐走向衰老、死亡。 将培养的细胞从一个容器以适当比率转移到其他容器中进行扩大培养,称为细胞传代。 传代培养的目的是实现细胞扩增,为后续实验做准备;避免因细胞进入平台期或衰亡期,而发生大量...
1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代。①弃去培养上清,用PBS或盐水清洗1-2次;②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱...
细胞冻存 1. 待细胞生长至可传代的密度,即可准备冻存。2. 消化细胞,取少量细胞悬液计数。细胞悬液经250 g离心4 min。3. 离心后去除上清,用适量4℃预冷的冻存液重悬细胞。将细胞按比例或数量分装至冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)×106个/mL。注意: 细胞长时间在非培养条件下放置会严重影响细胞...
细胞复苏 细胞复苏的原则-快速融化:必须将冻存在-196℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。 具体操作: 一. 实验前准备: 1. 将水浴锅预热至37℃ 2. 用75%...
2)悬浮细胞培养传代:移液管吹打细胞收集到离心管中,若是悬浮细胞吹打重悬后移入离心管(无胰酶消化步骤),1000rpm 室温离心5min,弃去上清,加入适量培养基重悬,细胞计数后吸取所需细胞到培养器皿,补加培养基,37℃,5% CO₂孵箱培养。 四、细胞冻存与复苏 ...
复苏开始 1.准备好培养皿(9cm皿)放入8-9ml培养基 2.将冻存管从液氮或-80冰箱取出,放在37度水浴锅中,一分钟速溶,期间手一直在晃动震荡 3.身边人复苏有好几种方法,我总结了一下 a.将解冻的细胞直接吸取加入培养基中,放进培养箱 b.将解冻的细胞直接1000rpm3-5min离心,枪吸走上清,重悬加入培养基中 ...
1.2 细胞复苏培养 (1)根据细胞冻存记录取出需要复苏的细胞。 (2)迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动, 使管中的液体迅速融化。 (3)约 1-2 min 后冻存管内液体完全溶解,取出放入离心机中以 1000 rpm/min 速度离心 3~5 min。 (4)用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入生物安全...