瞬时转染法是将DNA导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中，重组DNA导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的DNA不必整合到宿主染色体，可在比稳定转染较短时间内收获转染的细胞，并对溶解产物中目的基因的表达进行检测 。第一，操作简易和周期短。传统的稳定转化系统，从转化到获得转基因植株至少...
图2. 稳定转染方式 操作过程对比瞬时转染与稳定转染在实验步骤上既有相似之处，也存在显著差异，尤其是在实验周期和操作复杂度方面。以下是这两种技术的流程对比（见图3、图4）：图3. 瞬时转染流程图 图4. 稳定转染流程图相似之处01细胞准备：都需要选择适当的细胞系，并将其培养至对数生长期，以确保细胞处于最...
293 和 CHO 细胞瞬时转染 通过对适应悬浮培养的HEK293细胞和 CHO 细胞进行大量瞬时转染,已满足了获得大量重组蛋白的需求,而不必依赖于耗时费力的稳定细胞系开发过程。 哺乳动物细胞中瞬时蛋白表达的其他优势包括: 3-7 天内快速完成从克隆基因到大量蛋白表达的过程 ...
本文借助设计实验（DoE）方法，快速分析了瞬时转染CHO细胞表达系统中多项工艺参数对蛋白表达的影响，并开发了一种简便、稳健的工艺，适合高通量表达及Wave生物反应器的放大生产[1]。实验方法 通过Box-Behnken实验设计（图1），研究了DNA浓度、PEI:DNA比例及细胞密度对转染效率的影响。研究同时考察了两种转染方式：1）预...
细胞转染作为生命科学领域的一项关键技术,其原理在于,在一定条件下,细胞能够主动或被动地导入外源基因(DNA、RNA)等遗传物质,从而获得新的表型特性。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染两大类。 本期细胞学堂将对这两种转染方式的原理、操作及转染方法进行全面的比较分析,帮助您轻松选择适合的转染技术,顺利开展实验。
细胞转染前的准备: 1、细胞:贴壁生长细胞:一般要求在转染前一日,必须应用胰酶处理成单细胞悬液,重新接种于培养皿或瓶,转染当日的细胞密度以70-90%(贴壁细胞),最好在转染前2 -4 h换一次新鲜培养液。 悬浮…
瞬时转染 核酸不会整合到宿主基因组中 存在和表达的时间有限 更简单,更省力 可以使用 DNA 或 RNA 进行 适用于需要短暂修饰细胞的应用(例如,mRNA 瞬时表达、RNAi 分子的瞬时表达) 稳定转染 核酸通常会整合到宿主基因组中 支持长时间基因表达 更加费力,而且需要使用可筛选标...
对于每个转染样品(以六孔板为例),按如下方步骤制备转染复合物: 1) Lipo2000稀释液:取合适的EP管加入1500μl(250μl/孔) Opti-MEM,加入60μl(10μl/孔)Lipo2000混匀,室温下静置5分钟。 2) DNA稀释液:根据DNA的种类不同,分别于EP管中加入250μl/孔Opti-MEM,再加入4μg/孔质粒DNA轻轻混匀。
1.在转染前一天,按照0.8~1.0x10^6接种293悬浮细胞,使其在转染时细胞密度达到1.5~2.0x10^6个细胞/ml。确保细胞活率大于95%;2.无内毒素质粒大提,A260/A280在1.8~2.0之间3.转染当天,以转染100ml为例:A液:DNA 100ug+5ml 培养基B液:PEI 300ug+5ml 培养基4.A液和B液分别混