再新建一个文件,同样粘贴CDS序列 头端:保护碱基+酶切位点+促表达序列GCCACC+20bp引物 一般前面的不加尾端保护碱基,后面的不加前端保护碱基 尾端:去TGA的20bp引物+标签序列+TGA+酶切位点+保护碱基 点击序列→ 按照顺序勾选前面的一段碱基然后点击primer→add→修改名字 上游引物选择Top Strand 下游引物选择Bottom...
过表达载体构建必备一|过表达载体构建的步骤|克隆引物设计|转化|质粒纯化|限制性双酶切|T4DNA连接酶连接, 视频播放量 24817、弹幕量 12、点赞数 818、投硬币枚数 342、收藏人数 1269、转发人数 157, 视频作者 西分测小师妹, 作者简介 ,相关视频:无缝克隆重组酶与T4连接酶
过表达载体步骤: 1、目的基因CDS区碱基序列的获取及引物设计 NCBI下载基因CDS区碱基序列 ;选择载体:pcDNA3.1 根据载体和碱基序列进行引物设计; 引物组成:5’-保护碱基+酶切位点+引物序列-3’ 2、PCR扩增目的基因 3、质粒纯化 保证质粒空载 4、限制性酶切 对目的基因和质粒进行双酶切(防止质粒DNA和目的基因的自身...
(1)从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA,通过___获得___用于PCR扩增。 (2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2),为方便构建重组质粒,在引物中需要增加适当的___位点。设计引物时需要避免引物之间形成___,而造成引物自连。 (3)图中步骤1代表高温变性,可以使双链___,步骤...
【解析】(1)PCR扩增目的基因,首先要有目的基因作为模板,所以从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA,通过逆转录获得cDNA,从而用于PCR扩增。(2)构建重组质粒,首先用限制酶切割含目的基因的DNA片段和质粒,所以位于目的基因两端的引物中需要增加适量的限制酶位点。设计的引物之间不能有碱基互补配对,否则引物自连,不能与模板...
【题目】 癌细胞表面蛋白“ PDL-1 ”与T细胞表面蛋白“ PD-1 ”特异性结合后,可抑制 T 细胞活性并启动其凋亡,导致肿瘤细胞发生免疫“逃逸”。研究者对“ PD-1 ”基因进行克隆、表达及生物学活性鉴定,为制备抗体打基础。研究中所用引物 α 和 β 碱基序列见
( 1 )首先提取细胞中的 mRNA 反转录生成 ___ 作为模板:设计含有不同的限制酶切点的 α 和 β 序列为引物,通过 ___ 技术扩增目的基因。 ( 2 )选用图 1 中的两种名称分别为 ___ 的限制酶将“ pIRES2 ﹣ EGFP 质粒”载体进行双切,再用 DNA 连接酶将其与目的基因拼接,构建表达载体。该表达载体的组成,...
(1)若要体外获得大量的人生长激素基因,可采用PCR技术进行扩增,该技术中,对设计的引物之间的碱基对要求是___。若该目的基因循环扩增3次,理论上需要消耗___个引物。 (2)在构建基因表达载体过程中,一般情况下质粒和目的基因需用___进行切割。构建的重组质粒上启动子的本质和作用是___ (3)将重组质粒通过___法...
【题目】 穿梭载体是一类具有两种不同复制原点、能在两种不同的生物体(物种不同)中复制的载体,一般在原核生物和真核细胞中都能复制和表达,如 Ti 质粒和哺乳动物表达质粒 pMT2 。回答下列问题。 ( 1 )构建基因表达载体前,需先获取目的基因。 PCR 技术可
打开空载质粒psin 寻找载体上有 但目的基因序列上没有的酶切位点 点击酶→第一个选择……→输入载体上的酶的名称 在最下面点击酶 蓝色框框为可选择的酶 再新建一个文件,同样粘贴CDS序列 头端:保护碱基+酶切位点+促表达序列GCCACC+20bp引物 一般前面的不加尾端保护碱基,后面的不加前端保护碱基 ...