(2)目的基因的扩增可以通过PCR技术进行,为了准确获取目的基因,设计引物对是关键,设计引物对的依据绿色荧光蛋白基因两端的部分DNA序列.(3)①根据题意可知,绿色荧光蛋白基因有720个碱基对(bp),质粒有5369个碱基对(bp).图中质粒经BamHⅠ、HindⅢ双酶切后进行电泳,出现了一条长度为5300bp的DNA条带(如图1),说明...
(1)从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA,通过___获得___用于PCR扩增。 (2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2),为方便构建重组质粒,在引物中需要增加适当的___位点。设计引物时需要避免引物之间形成___,而造成引物自连。 (3)图中步骤1代表高温变性,可以使双链___,步骤...
【题目】 癌细胞表面蛋白“ PDL ﹣ 1 ”与 T 细胞表面蛋白“ PD ﹣ 1 ”特异性结合后,可抑制 T 细胞活性并启动其凋亡,导致肿瘤细胞发生免疫“逃逸”。研究者对“ PD ﹣ 1 ”基因进行克隆、表达及生物学活性鉴定,为制备抗体打基础。研究中所用引物 α
故选用 XhoI 限制酶和 EoRI 限制酶将“ pIRES2-EGFP 质粒”载体进行双切,再用 DNA 连接酶将其与目的基因拼接,构建基因表达载体。基因表达载体的组成包括目的基因、标记基因、启动子、终止子、复制原点等。 ( 3 )根据第( 2 )题可知,基因表达载体上的标记基因是卡那霉素抗性基因,因此一定温度下,与经过 Ca 2+...
【题目】 穿梭载体是一类具有两种不同复制原点、能在两种不同的生物体(物种不同)中复制的载体,一般在原核生物和真核细胞中都能复制和表达,如 Ti 质粒和哺乳动物表达质粒 pMT2 。回答下列问题。 ( 1 )构建基因表达载体前,需先获取目的基因。 PCR 技术可
故选用 XhoI 限制酶和 EoRI 限制酶将“ pIRES2-EGFP 质粒”载体进行双切,再用 DNA 连接酶将其与目的基因拼接,构建基因表达载体。基因表达载体的组成包括目的基因、标记基因、启动子、终止子、复制原点等。 ( 3 )根据第( 2 )题可知,基因表达载体上的标记基因是卡那霉素抗性基因,因此一定温度下,与经过 Ca 2+...
故选用 XhoI 限制酶和 EoRI 限制酶将“ pIRES2-EGFP 质粒”载体进行双切,再用 DNA 连接酶将其与目的基因拼接,构建基因表达载体。基因表达载体的组成包括目的基因、标记基因、启动子、终止子、复制原点等。 ( 3 )根据第( 2 )题可知,基因表达载体上的标记基因是卡那霉素抗性基因,因此一定温度下,与经过 Ca 2+...
【解析】(1)PCR扩增目的基因,首先要有目的基因作为模板,所以从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA,通过逆转录获得cDNA,从而用于PCR扩增。(2)构建重组质粒,首先用限制酶切割含目的基因的DNA片段和质粒,所以位于目的基因两端的引物中需要增加适量的限制酶位点。设计的引物之间不能有碱基互补配对,否则引物自连,不能与模板...
(2)利用PCR技术扩增目的基因的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列,以便合成引物;根据题意分析,在构建基因表达载体时,需要在引物的5′端加上限制性酶切位点,且常在两条引物上设计加入不同的限制性酶切位点,主要目的是使DNA片段能定向插入表达载体,减少自连。 (3)在将目的基因导入大肠杆菌时,需要先用钙离子...
【解析】解:(1)PCR扩增目的基因,首先要有目的基因作为模板,所以从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA,通过逆转录获得cDNA,从而用于PCR扩增.(2)构建重组质粒,首先要用限制酶切割含目的基因的DNA片段和质粒,所以位于目的基因两端的引物中需要增加适当的限制性核酸内切酶位点.设计的引物之间不能有碱基互补配对,否则引物自...