方法以体内胶原酶灌注消化为基础,使用 Percoll、OptiPrep 等不同的试剂和浓度梯度分 别提取 C57BL/ 6 小鼠的肝枯否细胞和肝星状细胞,并通过流式细胞仪、免疫荧光等方法验证纯化细胞的纯度。 结果两层 Percoll 法提取枯否细胞和两层 OptiPrep 法提取肝星状细胞可行,纯度可达 90%以上,细胞得率为 1 ~ 2× 10 ...
摘要 本发明涉及细胞分离领域,公开了一种小鼠肝星状细胞分离、提取与培养的方法。该方法包括以下步骤:准备12周以上的成年小鼠,灌流得到体内消化后的肝脏,经加双抗的DMEM多次清洗后,进行肝脏的捣碎,捣碎后的肝脏经胶原酶和链霉蛋白酶混合液,37℃水浴锅中消化10分钟后,过200目滤网,经离心,去上清,密度梯度离心后,用...
小鼠原代星状细胞提取方法 大鼠原代星状细胞提取方法 1、原位灌注：1、1ml 5%水合氯醛麻醉大鼠，腹壁酒精消毒，十字切口打开腹腔，用湿棉签将肠管推向左侧，暴露门静脉和下腔静脉。2、将充满灌流液的针（0.45或0.55的头皮静脉针）经小口插入门静脉（不要插的过深），止血夹或线结扎，软管部分用纸胶布固定以免...
优选地,为确保能够获得较多数量的肝星状细胞,作为本发明分离、提取与培养小鼠肝星状细胞的方法的改进,小鼠为12周以后成年偏肥胖的小鼠。 进一步地,所述结扎小鼠的上腔静脉是将小鼠用3.6%水合氯醛麻醉后,浸泡在酒精中5-10秒,随后将小鼠置于解刨板上,刨开小鼠表皮与黏膜后,用手术线将连接小鼠肝脏的上腔筋脉进行结扎。
免疫荧光等方法验证纯化细胞的纯度.结果 两层Percoll法提取枯否细胞和两层OptiPrep法提取肝星状细胞可行,纯度可达90%以上,细胞得率为1~2×10~7/肝,细胞存活率在90%以上.细胞原代培养48 h后,枯否细胞F4/80阳性细胞,肝星状细胞α-SMA阳性细胞均达90%以上.结论 小鼠肝中枯否细胞和肝星状细胞的分离提取方法完善...