LightCycler® 480 实时定量 PCR 仪 96 或 384多孔板等 2.实验操作流程 反转录反应 Q-PCR 扩增 三、实验步骤 反转录反应 配置Template primer mix RNA 变性及反转录 2.Q-PCR 扩增 配置PCR 反应体系 设置并运行 PCR 程序 3.程序设定 在LightCycler® 480 软件中设置反应程序 样品编辑与结果分析 实验结束后...
实时荧光定量RT-PCR技术需要在常规PCR基础上添加荧光染料或荧光探针,荧光染料能特异性掺入DNA双链中,从而发出荧光信号。在新冠病毒肺炎疫情期间,可以通过实时荧光定量RT-PCR技术进行核酸检测。下列相关叙述正确的是( ) A. 图中的探针可能是利用荧光分子标记的新冠病毒独特的基因序列 B. 核酸检测是通过检测荧光信号来确...
TaqMan荧光探针: PCR 扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针,该探针为一寡核苷酸,两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时,报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收;PCR 扩增时,Taq 酶的 5'-3’ 外切酶活性将探针酶切降解,使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离,从而荧光监测系统可接收...
自发明以来的 30 多年里，聚合酶链式反应 (PCR) 已成为分子生物学家的主要技术。 其不可或缺的秘诀在于其简单性和多功能性。 该技术的许多变体已经被开发出来； 其中之一，实时PCR，已成为基因表达定量研究、确定临床样本中的病原体载量以及检测 SNP/突变的首选方法。什么是实时 PCR？顾名思义，实时 PCR 在...
一. RT-qPCR 基本原理和概念实时荧光定量PCR (Quantitative Real-time PCR)是一种在DNA扩增反应中,以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应(PCR)循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。 以cDNA 为模板进行 PCR,在 PCR 扩增过程中,通过收集荧光信号,对 PCR进程进行实时...
新冠病毒核酸检测是目前筛查新冠感染者最精准、有效、低成本的技术方式。核酸检测主要用荧光定量RT-PCR技术,这种技术是RT-PCR技术与荧光定量PCR技术的结合。实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR)是通过荧光信号,对PCR进程进行实时检测。由于在PCR扩增的指数时期,模板的Ct值和该模板的起始拷贝数存在线性关系,所以成为...
实时荧光定量PCR（RT-PCR）模板定量策略 实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR）是一种在DNA扩增反应中，以荧光化学物质测每次聚合酶链式反应（PCR）循环后产物总量的方法。通过内参或者外参法对待测样品中的特定DNA序列进行定量分析的方法。想了解更多精彩内容，快来关注PCR检测试剂盒博湖 在Real-time PCR（...
实时荧光定量PCR技术有效地解决了传统定量只能终点检测的局限,实现了每一轮循环均检测一次荧光信号的强度,并记录在电脑软件之中,通过对每个样品Ct值的计算,根据标准曲线获得定量结果。因此,实时荧光定量PCR无需内标是建立在两个基础之上的: 1)Ct值的重现性 PCR循环在到达Ct值所在的循环数时,刚刚进入真正的指数扩增期...
如图为采用“实时荧光定量RT-PCR”技术检测新型冠状病毒核酸的基本流程,1～2h内即可得到检测结果。其基本原理是在DNA的复制过程中加入与特定模板链互补的荧光探针,这样