1.基因敲除(Knockout):通过CRISPR-Cas9在目标基因上引入双链断裂(DSB),细胞通过非同源末端连接(NHEJ)修复机制修复断裂,过程中可能引入插入或缺失(indels)突变,导致目标基因功能丧失。 2.基因插入或替换(Knockin):利用同源重组(HDR)机制,在目标基因上引入特定的突变或外源序列。这需要提供一个含有所需改变的同源模板DN...
CRISPR-Cas9基因编辑技术就是通过人工设计的 sgRNA(guide RNA)来识别目的基因组序列,并引导 Cas9 蛋白酶进行有效切割 DNA 双链,形成双链断裂,损伤后修复会造成基因敲除或敲入等,最终达到对基因组DNA 进行修饰的目的。 CRISPR-Cas9的广泛应用 1、基因敲除(Knock-out) Cas9可以对靶基因组进行剪切,形成DNA的双链断裂。
将携带CRISPR/Cas9的质粒递送到特定细胞中需要载体,而载体需要满足以下特点才能在体内有效:(1)载体必须在血液中保持稳定,而不会降解或免疫清除,(2)载体随后在候选物组织中积累并触发细胞内吞作用,以及(3)CRISPR系统将溶酶体逃逸到细胞质中以执行基因组编辑或调节基因表达...
CRISPR-Cas9基因编辑载体构建 在植物中进行基因编辑通常需要同时构建Cas基因表达盒和sgRNA表达盒。Cas基因的表达通常由35S或Ubi等RNA聚合酶II启动子驱动,以Nos终止子或其他终止子终止;sgRNA表达盒比较小,一般由长约300 bp的U3或U6等RNA聚合酶III启动子驱动,以连续6个以上的T碱基终止即可。目前常用的基因编辑载体骨架所...
研究团队首先发现了CRISPR-Cas9基因编辑系统中脱靶背后的结构机制,在此基础上重新设计了Cas9蛋白——SuperFi-Cas9,其脱靶概率降低了数千倍,且编辑效率与原始版本的Cas9蛋白相同。 CRISPR-Cas9基因编辑,通过向导RNA(gRNA)将Cas9酶靶向目标DNA序列,Cas9酶切割目标DNA双链,造成DNA双链断裂,从而实现基因编辑,其中,向导RNA(gR...
CRISPR-Cas9 技术能够用来修复致病的基因突变。在这个情形下，科学家把外源的修复模板弄进细胞里，借助 HDR 修复机制达成对基因的精准修复。修复模板一般就是一段有着目标基因正确序列的 DNA 片段。Cas9 蛋白质在目标位点造成 DSB 以后，修复模板会被拿来当作 DNA 修复的模板。通过这种办法能够把基因里的突变纠正过来...
图4.可用的 CRISPR-Cas9 核酸酶和 gRNA 形式。 CRISPR 特色产品 CRISPR 蛋白 CRISPR 对照 CRISPR mRNA CRISPR 质粒 CRISPR 文库 CRISPR gRNA CRISPR 特色工具和资源 TrueDesign Genome Editor 软件 Invitrogen TrueDesign 基因组编辑软件是一款免费的基因编辑设计工具,可让您轻松设计、选择和...
CRISPR/Cas 系统由一小段 RNA 和一种高效的 DNA 切割酶 (Cas 核酸酶) 组成的系统，该技术不像 TALENs 技术和 ZFNs 技术是依赖于蛋白与靶基因之间的识别，而是由 sgRNA 和靶基因之间形成复合物，从而完成特定基因序列的编辑。CRISPR/Cas9 技术切割效率相对较高且操作简单，并且可以同时进行多位点的编辑。总之，...
Cas9基因敲除细胞系服务 Cas9-Cell Line Gene Knock-Out service(CGKO)基因敲除细胞系服务是针对各种常用的细胞系,进行基因片段敲除的技术服务。 主要提供:Cas9介导的大片段基因敲除(非移码)的方式导致细胞基因功能缺失,基因敲除可以将基因功能完全消除,比RNA干扰获得的数据更加确定,没有RNA干扰残留的基因功能背景的干扰...