对筛选出的阳性克隆进行进一步的鉴定和验证。常用的方法包括PCR分析、酶切验证和测序分析等。这些步骤可以确保所得到的克隆是目标DNA片段的正确复制。 七、扩增与纯化 对经过验证的阳性克隆进行大规模扩增,并从宿主细胞中提取和纯化重组DNA分子。这些纯化后的重组DNA分子可用于后续的基因表达研究、功能验证或生产应用。
【题目】分子克隆的基本步骤。 相关知识点: 试题来源: 解析 【解析】 【考点】分子克隆的步骤。 【答案】(1)分离制备待克降的DNA片段;(2)克隆基因载体的选择与构键;(3)重组DNA分子的构 建;(4)重组DNA分子导入受体细胞和重组克隆的筛选;(5)特定重组克隆的鉴别。
分子克隆技术步骤 第一步:选取目标DNA 在开始分子克隆之前,需要从一个生物体中选择一个含有所需DNA序列的样本。这可以是任何生物体的DNA,例如人类、动物、植物或微生物。 第二步:DNA提取 从所选生物体提取DNA。这可以通过使用一系列化学和物理方法来完成,例如细胞裂解、蛋白酶处理、DNA沉淀和洗涤等。 第三步:...
克隆的插入片段来源可能为基因组 DNA、另一质粒的一部分或者线性 DNA 片段。无论来源 DNA 类型如何,制备插入片段时常用的第一个步骤是进行限制性酶切,产生匹配的粘性末端,以便接下来将片段插入在载体中。 与载体制备一样,选择适于将插入片段克隆进载...
下面是分子克隆的主要步骤: 1.DNA提取:首先需要从一个已知的DNA源(例如细菌、动物组织等)中提取所需的DNA。这可以通过使用不同的提取方法(如酚/氯仿提取、自动提取仪等)来实现。 2.限制性内切酶切割:将目标DNA切割成片段。此步骤可以通过使用限制性内切酶来实现,这些酶可以识别特定的DNA序列,并在这些序列中切割...
[问答题,简答题] 什么是分子克隆?主要有哪些步骤?相关知识点: 试题来源: 解析 分子克隆是体内产生大量特定DNA片段的技术,过程中主要有四步: ①构建重组载体,涉及剪切、修饰和供体DNA与载体在体外的连接; ②将重组载体导入合适的宿主细胞中; ③含有载体的细胞选择性增殖 抽提和纯化克隆的DNA。
【答案】：分子克隆的基本步骤包括：(1)分离制备待克隆的DNA片段 ①用限制性核酸内切酶将DNA切成一定大小的DNA片段;②用物理方法( 如超声波)取得DNA随机片段;③在已知蛋白质的氨基酸顺序情况下，用人工方法合成对应的基因片段;④从mRNA反转录产生cDNA。(2)克隆基因载体的选择与构建 克隆载体可以选择质粒、...
受体细胞经过一些特殊方法(如:CaCl2,RuCl等化学试剂法)的处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell)。在基因克隆技术中,转化(transformation)特指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化过程所用的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷的变异株,不含限...
分子克隆的五个步骤 1 选择载体：在分子克隆的过程中，首先需要选择一种合适的载体来实现这一 过程。载体是要被克隆的DNA片段，生物体中的某种大分子结构，可 以为克隆提供容器。一般来说，载体选择最好是含有可重复使用的重 组信息，如使用多种重组酶克隆更为容易和可靠，能在实验室之间转移。该步骤需要考虑选择...
解析 重组DNA的主要步骤主要包括以下四个基本步骤: (1)目的基因的获得; (2)目的基因与载体分子在体外进行连接反应,形成重组体; (3)将人工重组的DNA分子导入能进行正常复制的寄主细胞,从而得到复制; (4)重组体分子的转化子克隆的选择和筛选。 反馈 收藏 ...