在分子克隆工作中,我们主要进行克隆载体的构建、目标DNA的扩增、将目标DNA插入克隆载体中、转化和筛选等步骤。下面将详细介绍这些步骤: 1.克隆载体的构建: 克隆载体是用于插入目标DNA的DNA分子。常用的克隆载体包括质粒、噬菌体和人工染色体等。在构建克隆载体时,我们首先需要选择适合的载体,并提取载体的DNA。然后,利用...
分子克隆详细步骤 分子克隆步骤：一、贴壁细胞总RNA提取：1、吸掉培养液，用PBS洗一遍?2、往培养皿中加入1ml,TRIzol,吹打几次(每10cm2面积,即3.5cm直径的培养板加1ml)3、移至1.5mlEP管，静置5分钟4、加入200ul三氯甲烷，震荡混匀，室温静置5分钟5、4度12000r/min，离心15分钟，取上清，约600ul6、加入...
分子克隆技术步骤 在分子水平上提供一种纯化和扩增特定 DNA 片段的方法。 常含有目的基因, 用体外重组方法将它们插入克隆载体, 形成重组克隆载体, 通过转化与转导的方式, 引入适合的寄主体内得到复制与扩增, 然后再从筛选的寄主细胞内分离提纯所需的克隆载体, 可以得到插入 DNA 的许多拷贝, 从而获得目的基因的扩增。
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分子克隆详细步骤 分子克隆步骤：一、贴壁细胞总RNA提取：1、吸掉培养液，用PBS洗一遍?2、往培养皿中加入1ml,TRIzol,吹打几次(每10cm2面积,即3.5cm直径的培养板加1ml)3、移至1.5mlEP管，静置5分钟4、加入200ul三氯甲烷，震荡混匀，室温静置5分钟5、4度12000r/min，离心15分钟，取上清，约600ul6、加入...
分子克隆步骤: 一、贴壁细胞总RNA提取: 1、吸掉培养液,用PBS洗一遍? 2、往培养皿中加入1ml,TRIzol,吹打几次 3、移至1.5mlEP管,静置5分钟 (每10cm2 面积,即 3.5cm 直径的培养板加 1ml) 4、加入 5、4度 6、加入 7、4度 200ul三氯甲烷,震荡混匀,室温静置 12000r/min,离心15分钟,取上清,约 500...