细胞类型和组织特异性:根据实验样本类型,选择适合的内参。例如,β-actin常用于哺乳动物细胞,而Tubulin则更适合检测细胞骨架蛋白。推荐使用一些常见的内参,如β-actin、GAPDH和HSP90。这些内参在大多数细胞类型中都有稳定表达,且分子量适中,容易检测。在选择内参时,还需要注意一些实验细节。比如,确保内参和目标蛋白的抗体...
内参基因，也成为“管家基因”、“持家基因”，因其在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因表达水平变化时被用作参照物，所以被叫做内参基因。内参基因可以用于矫正由于上样量、上样过程中存在的误差。理想的内参基因的选择可以有效提高荧光定量PCR的灵敏度和重复性。理想的内参基因应在研究的各种试验因素条件下均...
1.样本种属来源:根据实验样本的来源选择合适的内参。例如,哺乳动物的组织或细胞样本通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B等内参。植物来源实验样本则可以选择Plant actin、Rubisco等内参。对于研究跨物种的蛋白质时,选择具有适当跨物种反应性的内参。 2.目的蛋白分子量:避免使用分子量与目的蛋白相近的蛋白作为内...
由于GAPDH是糖酵解过程中的酶，所以关于糖代谢的研究（如糖尿病模型）不能选择GAPDH作为内参；而某些细胞中，缺氧也会影响GAPDH的表达，此时也不可以选择GAPDH作为内参；将肿瘤组织与正常组织相比时，最好也不要选择GAPDH作为内参，因为很多肿瘤组织中的GAPDH相对于正常组织是高表达的，并且有文献报道GAPDH可以作为肿瘤标...
1 在脂肪组织里,β-Actin的表达量非常低,不适合作为内参。 2 不同组织的细胞结构会有差异性,如脑组织的 tubulin 的表达会高一些(因为神经细胞的轴突和树突都由 tubulin 维持结构),而 actin 的表达量可能会低一些。再比如,骨骼肌、心肌和平滑肌的特殊功能反而导致...
样本种属来源:不同种属的样本可能需要选择不同的内参蛋白。例如,哺乳动物的组织或细胞样本常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等,而植物样本可能选择plant actin、Rubisco等作为内参。 细胞定位:根据目标蛋白的亚细胞定位选择相应的内参。例如,如果是检测全细胞或细胞质蛋白,可以选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等;如果是...
内参基因是指在大多数样品类型中普遍表达,其丰度通常不受生物条件变异影响的基因。选择内参基因需要遵循以下原则: 高度或中度表达:内参基因的表达水平应相对稳定,不能过高或过低。 表达稳定:在不同条件下,内参基因的表达量应保持一致。 不同样本类型选择不同的内参基因:针对不同的样本类型,需要选择合适的内参基因。
内参选择 伪道 朝闻道2 人赞同了该文章 GAPDH,Tubulin,Actin是WB实验中最常用的三种上样内参(loading control),因被认为表达水平受环境因素影响较小,在个体各个生长阶段的大多数或几乎全部组织中持续表达或变化很小,所以被称为管家基因(house-keeping genes),是WB实验中校正上样量、检测上样过程中存在实验误差,保证...
样本种属来源:不同种属的样本可能需要选择不同的内参蛋白。例如,哺乳动物的组织或细胞样本常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等,而植物样本可能选择plant actin、Rubisco等作为内参。 细胞定位:根据目标蛋白的亚细胞定位选择相应的内参。例如,如果是检测全细胞或细胞质蛋白,可以选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等;如果是...
以下是不同实验条件下内参选择的建议: 细胞骨架相关蛋白:如果研究的是与细胞骨架相关的蛋白,如肌动蛋白(Actin),那么β-肌动蛋白(β-actin)可能不是最佳选择,因为它在细胞骨架重组时可能会受到影响。可以考虑使用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)或线粒体蛋白作为内参。