在选择内参蛋白时,我们首先需要考虑样品的物种来源以及目的蛋白的表达部位,如全细胞、细胞核、细胞质、细胞膜或血清、血浆样本等。 🔷全细胞:常用的内参蛋白包括GAPDH、β-肌动蛋白(β-actin)和β-微管蛋白(β-tubulin)。这些蛋白在大多数哺乳动物细胞中表...
例如,哺乳动物的组织或细胞样本常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等,而植物样本可能选择plant actin、Rubisco等作为内参。 细胞定位:根据目标蛋白的亚细胞定位选择相应的内参。例如,如果是检测全细胞或细胞质蛋白,可以选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等;如果是核蛋白,则可能选择Lamin B、Histone H3等作为内参。 实验环...
例如,哺乳动物的组织或细胞样本常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等,而植物样本可能选择plant actin、Rubisco等作为内参。 细胞定位:根据目标蛋白的亚细胞定位选择相应的内参。例如,如果是检测全细胞或细胞质蛋白,可以选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等;如果是核蛋白,则可能选择Lamin B、Histone H3等作为内参。 实验环...
内参即是内部参照(Internal control),是指在组织和细胞中表达相对稳定的一类蛋白质,通常由管家基因编码。这些蛋白质被用作检测蛋白表达水平变化时的参照物,以确定实验的准确性和可重复性。 在Western Blot实验中,我们使用内参其实就是使用与内参对应的抗体来检测内参的表达量。由于内参在不同组织和细胞中的表达量相对...
2、选择内参的依据 (1) 种属来源:根据所做的蛋白样本的种属确定,哺乳动物一般β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B、Na+/K+-ATPase等;植物样本一般选择Plant actin、Rubisco等;其他来源样本应参考文献报道选怎合适蛋白作为内参。 (2) 蛋白表达位置:由于研...
在选择内参时，重要的是考虑您的实验条件和研究背景。不同的细胞类型和实验目的可能需要不同的内参。在做多组织多细胞样本对比表达量时，最好选用GAPDH作为内参，因为GAPDH是代谢类蛋白，在活组织中表达比较恒定。而beta Actin和beta Tubulin是结构蛋白，不同组织的细胞结构会有差异性。建议事先进行文献查阅和预实验，...
内参即是内部参照(Internal Control),一般是指由管家基因编码表达的蛋白(Housekeeping Proteins),它们在各组织和细胞中的表达相对恒定,在检测蛋白的表达水平变化时常用它来做参照物。 2 内参的作用? Western blot实验常常用于比较不同条件下或者不同组织中目的蛋白表达量的相对多少,而前提条件是等量的细胞上样,才有比较...
内参基因，也成为“管家基因”、“持家基因”，因其在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因表达水平变化时被用作参照物，所以被叫做内参基因。内参基因可以用于矫正由于上样量、上样过程中存在的误差。理想的内参基因的选择可以有效提高荧光定量PCR的灵敏度和重复性。理想的内参基因应在研究的各种试验因素条件下均...
样本种属来源:不同种属的样本可能需要选择不同的内参蛋白。例如,哺乳动物的组织或细胞样本常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等,而植物样本可能选择plant actin、Rubisco等作为内参。 细胞定位:根据目标蛋白的亚细胞定位选择相应的内参。例如,如果是检测全细胞或细胞质蛋白,可以选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等;如果是...