例如,哺乳动物的组织或细胞样本常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等,而植物样本可能选择plant actin、Rubisco等作为内参。 细胞定位:根据目标蛋白的亚细胞定位选择相应的内参。例如,如果是检测全细胞或细胞质蛋白,可以选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等;如果是核蛋白,则可能选择Lamin B、Histone H3等作为内参。 实验环...
例如,哺乳动物的组织或细胞样本常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等,而植物样本可能选择plant actin、Rubisco等作为内参。 细胞定位:根据目标蛋白的亚细胞定位选择相应的内参。例如,如果是检测全细胞或细胞质蛋白,可以选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等;如果是核蛋白,则可能选择Lamin B、Histone H3等作为内参。 实验环...
1️⃣ 根据目的蛋白的表达部位来选择。如果你的目的蛋白在细胞核中,那么选择核内参,如Lamin A或Lamin B。 2️⃣ 选择不受环境影响的“稳定选手”。有些内参对实验条件的变化非常敏感,我们要选择那些“淡定”的内参,确保实验结果的稳定性。 3️⃣ 如果要进行多重免疫印迹,记得将内参抗体和目标蛋白抗体的...
🧬 针对细胞类型和组织:根据实验样本类型挑选合适的内参,如β-actin适合哺乳动物细胞。🌟 推荐使用β-actin、GAPDH和HSP90等内参,它们在多种细胞中稳定表达,分子量适中,易于检测。🔬 注意实验细节:确保内参抗体与目标蛋白抗体不干扰,并设置对照组以验证内参稳定性。选择合适的内参,让你的WB实验更加准确可靠!💪0...
在进行WB实验时,选择合适的内参是非常重要的。内参是用来校正样本上样量、上样过程中存在的实验误差,保证实验结果的准确性的。选择内参时需要遵循的原则主要包括:1.样本种属来源:根据实验样本的来源选择合适的内参。例如,哺乳动物的组织或细胞样本通常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH、Lamin B等内参。植物来源实验样本...
以下是不同实验条件下内参选择的建议: 细胞骨架相关蛋白:如果研究的是与细胞骨架相关的蛋白,如肌动蛋白(Actin),那么β-肌动蛋白(β-actin)可能不是最佳选择,因为它在细胞骨架重组时可能会受到影响。可以考虑使用甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)或线粒体蛋白作为内参。
内参基因，也成为“管家基因”、“持家基因”，因其在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因表达水平变化时被用作参照物，所以被叫做内参基因。内参基因可以用于矫正由于上样量、上样过程中存在的误差。理想的内参基因的选择可以有效提高荧光定量PCR的灵敏度和重复性。理想的内参基因应在研究的各种试验因素条件下均...
内参选择 GAPDH,Tubulin,Actin是WB实验中最常用的三种上样内参(loading control),因被认为表达水平受环境因素影响较小,在个体各个生长阶段的大多数或几乎全部组织中持续表达或变化很小,所以被称为管家基因(house-keeping genes),是WB实验中校正上样量、检测上样过程中存在实验误差,保证实验结果准确性必不可少的。
2.表达稳定:内参基因的表达水平在不同时间和不同细胞中应保持相对稳定,不受外界条件的影响。 3.在不同条件下表达稳定:内参基因的表达水平应不受实验条件(如处理措施、细胞周期和细胞活化状态)的影响。 4.不同样本类型中选择不同的内参基因:根据样本类型选择合适的内参基因。例如,对于哺乳动物组织,常用的内参基因包...
样本种属来源:不同种属的样本可能需要选择不同的内参蛋白。例如,哺乳动物的组织或细胞样本常选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等,而植物样本可能选择plant actin、Rubisco等作为内参。 细胞定位:根据目标蛋白的亚细胞定位选择相应的内参。例如,如果是检测全细胞或细胞质蛋白,可以选择β-actin、β-tubulin、GAPDH等;如果是...