步骤: 涂片或切片固定。 经适当稀释的免疫血清和补体等量混合滴于片上,放37℃湿盒中30分钟。 以0.01mol/L、pH7.2的PBS洗二次,每次4分钟,放干。 加入适当稀释的抗补体荧光抗体,37℃放置30分钟。 同步骤3)。 用蒸馏水洗2分钟,以PBS缓冲甘油或pH8.2甘氨酸缓冲甘油封固,镜检。 以上步骤应同时设阴性、阳性对照,...
9.染核/封片：在样本上滴加DAPI工作液，避光，室温，孵育10分钟；去除DAPI工作液，用缓冲液TBST洗涤1次，5分钟；用缓冲液TBS洗涤3次，每次5分钟；加入抗荧光衰减封片剂后，于荧光显微镜下观察并采集图像。➤Tips ◆ 封闭剂选择和二抗种属来源相同的血清，如果是直标一抗选择和一抗种属来源相同；◆ 封闭时间不易...
免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及通透(或称为透化)、封闭、抗体孵育及荧光检测等。细胞片制备(通俗的说法是细胞爬片)是免疫荧光实验的第一步,细胞片的质量对实验的成败至关重要,原因很简单,如果发生细胞掉片,一切都无从谈起。这一步关键的是玻片(Slides or Coverslips)的处理以及细胞的活力,有人根据...
实验步骤 免疫荧光实验通常包括以下几个主要步骤: 样本前处理: 细胞样本:洗涤细胞,去除培养基,加入固定液(如4%中性甲醛)进行固定,固定时间根据细胞类型和实验需求而定,一般为15-30分钟。 固定后,用缓冲液(如PBS)洗涤去除固定液。 石蜡切片样本:经过烤片、脱蜡、抗原修复等步骤,使抗原暴露出来。 冰冻切片样本:在OC...
免疫荧光实验的步骤一般分为样品处理、抗体处理、荧光染色和观察四个主要步骤。 第一步是样品处理。首先需要选择合适的样品,可以是细胞培养物、组织切片或动物体内的器官等。样品处理的目的是使样品适应实验条件并提取目标物,一般包括固定、脱水和透明化等步骤。固定可以采用乙醛或甲醛等化学物质,使细胞或组织保持形态结构...
免疫荧光又称免疫荧光抗体。免疫荧光实验原理是将荧光素标记在相应的抗体上,直接与相应抗原反应。其优点是方法简便、特异性高,非特异性荧光染色少,相对使用标记抗体用量偏大。利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。 下面详细介绍免疫荧光染色步骤: 1. 滴加 0.01mol/L,pH7.4 的PBS于待检标本片上,10min...
基本原理荧光显微镜操作步骤AlbertH.Coons(1912–1978)1941年,Coons首次建立免疫荧光技术,检测组织内抗原。基本原理免疫荧光(Immunofluorescence,IF)技术,是根据抗原-抗体反应的原理,用已标记了荧光素的荧光抗体(抗原)作为探针检查组织或细胞内相应的抗原(抗体),在组织或细胞中所形成的抗原-抗体复合物上沉着有荧光素,在...
原理:免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,制成荧光抗体,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检测组织或细胞内的相应抗原(或抗体)。在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光(黄绿色或橘红色),可以看...
2.实验原理 2.1免疫荧光的基础 首先,咱们得知道,免疫荧光其实是建立在抗体和抗原之间特异性结合的基础上的。抗体就像是专门找“坏蛋”的侦探,而抗原就是你想找的“坏蛋”。当你把特定的抗体加到组织切片上,这些抗体就会和你关注的目标蛋白结合,就像一对老朋友重逢一样,亲密无间。 而接下来的关键在于,这些抗体上...