◆选择高质量能满足免疫荧光应用和物种要求的一抗和荧光二抗,一抗二抗的稀释比例可以根据抗体说明书来,再结合自己具体的实验要求进行优化; ◆如果涉及到双标染色,切记要将两种蛋白的抗体来源种属区分开,二抗的荧光素也要区分开; ◆在洗涤过程中,一要注意动作轻柔,固定后的细胞比较脆弱,如果太过剧烈,很容易把细胞吹洗...
原理:免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,制成荧光抗体,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检测组织或细胞内的相应抗原(或抗体)。在组织或细胞内形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素,利用荧光显微镜观察标本,荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光(黄绿色或橘红色),可以看...
其原理是利用荧光染料与抗原或抗体结合形成复合物,然后通过荧光显微镜观察荧光信号的强度和位置,从而确定目标物的存在和分布情况。下面将详细介绍免疫荧光实验的步骤及其原理。 免疫荧光实验的步骤一般分为样品处理、抗体处理、荧光染色和观察四个主要步骤。 第一步是样品处理。首先需要选择合适的样品,可以是细胞培养物、...
自发荧光:指当无任何实验性荧光基团时,包括组织和细胞在内的材料发射出本底荧光的一种现象,这种自发荧光会降低信噪比; 自发荧光物质:烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH )/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADPH )、黄素和黄素蛋白、细胞外基质蛋白弹性蛋白和胶原质...
免疫荧光检测原理: 免疫荧光实验的主要步骤包括细胞片制备、固定及通透(或称为透化)、封闭、抗体孵育及荧光检测等。细胞片制备(通俗的说法是细胞爬片)是免疫荧光实验的第一步,细胞片的质量对实验的成败至关重要,原因很简单,如果发生细胞掉片,一切都无从谈起。这一步关键的是玻片(Slides or Coverslips)的处理以及细...
基本原理荧光显微镜操作步骤AlbertH.Coons(1912–1978)1941年,Coons首次建立免疫荧光技术,检测组织内抗原。基本原理免疫荧光(Immunofluorescence,IF)技术,是根据抗原-抗体反应的原理,用已标记了荧光素的荧光抗体(抗原)作为探针检查组织或细胞内相应的抗原(抗体),在组织或细胞中所形成的抗原-抗体复合物上沉着有荧光素,在...
2.实验原理 2.1免疫荧光的基础 首先,咱们得知道,免疫荧光其实是建立在抗体和抗原之间特异性结合的基础上的。抗体就像是专门找“坏蛋”的侦探,而抗原就是你想找的“坏蛋”。当你把特定的抗体加到组织切片上,这些抗体就会和你关注的目标蛋白结合,就像一对老朋友重逢一样,亲密无间。 而接下来的关键在于,这些抗体上...
基本原理 根据抗原抗体特异性结合的反应原理,用已结合示踪荧光标记物(通常是荧光标记物或者荧光蛋白)的抗体直接或间接识别抗原,示踪物质显色的地方即是抗原的所在区域。 双重染色类型 依据与抗原直接结合的抗体(通常称之为一抗)是否带有荧光标记物可将实验分为直接法和间接法。
实验步骤 免疫荧光实验通常包括以下几个主要步骤: 样本前处理: 细胞样本:洗涤细胞,去除培养基,加入固定液(如4%中性甲醛)进行固定,固定时间根据细胞类型和实验需求而定,一般为15-30分钟。 固定后,用缓冲液(如PBS)洗涤去除固定液。 石蜡切片样本:经过烤片、脱蜡、抗原修复等步骤,使抗原暴露出来。 冰冻切片样本:在OC...