通过在实验前后比较克隆形成率,研究人员可以评估潜在药物或治疗方案的疗效。 常用的手段有两个: ①平板克隆形成实验:通过将细胞培养于培养基中,主要适用于贴壁生长的细胞,以评估细胞的克隆形成能力。 ②软琼脂克隆形成实验:通过将细胞悬浮于含琼脂糖的培养基中,主要用于评估贴壁和悬浮的肿瘤细胞或转化细胞系的克隆形成...
根据细胞生长方式的不同，克隆形成的培养介质分为两类，即平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验。平板克隆形成实验：适用于贴壁生长的细胞，操作相对简单，细胞间可自由接触，利于形成克隆。软琼脂克隆形成实验：适用于悬浮生长的细胞，将细胞悬液与软琼脂混合，利用软琼脂为培养介质，形成克隆。图3. 软琼脂克隆形成制备...
(集落)克隆形成实验是测定细胞存活率和考察单个细胞增殖能力的有效方法之一。单个细胞在体外连续6代以上,其后代所组成的细胞群称为克隆或集落,这时每个克隆大小在0.3-1.0mm,含有50个以上的细胞,通过计数克隆形成率,可对单个细胞的增殖潜力做定量分析,常用的手段有两个:平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验。 平板克隆...
克隆形成实验(Colony Formation Assay),也称为集落形成实验,是一种体外细胞生存能力的测定方法,关键在于检测单个细胞能否生长成包含至少50个细胞的克隆,以测试细胞群中每一个细胞无限分裂的潜能。此方法最初由Puck和Marcus于1956年提出,描述了一种评估单个哺乳动物细胞在培养皿中形成克隆或集落能力的细胞培养技术。克隆形...
图1.常见 PCR 克隆策略。 为了进一步简化分子克隆实验流程,已经专门开发了特殊的载体来将插入目的片段,例如,不使用连接酶的载体。这样一类载体包括 Invitrogen™TOPO™ 克隆载体,其含有共价连接的DNA拓扑异构酶I,可同时作为限制性内切酶和连...
总结起来，分子克隆技术是一项重要的分子生物学技术，通过重组DNA分子，可以制备大量相同的DNA片段。它在基因研究、蛋白表达、基因治疗、农业改良和药物研发等领域有着广泛的应用。三、实验步骤 1.获取目的基因片段：①样本采样保存：为保证提取出的核酸质量优质且稳定，采样后应及时处理及妥善保存，以便于后续实验的成功...
图1.常见 PCR 克隆策略。 为了进一步简化分子克隆实验流程,已经专门开发了特殊的载体来将插入目的片段,例如,不使用连接酶的载体。这样一类载体包括 Invitrogen™TOPO™ 克隆载体,其含有共价连接的DNA拓扑异构酶I,可同时作为限制性内切酶和连接酶(详细了解...
实验原理 细胞克隆形成实验是用来检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等项目的重要技术方法。 当单个细胞在体外增殖6代以上,其后代所组成的细胞群体,成为集落或克隆。其中细胞克隆形成率即细胞接种存活率,表示接种细胞后贴壁的细胞成活并形成克隆的数量。
☆ 实验步骤 在分子克隆中,载体选择是非常关键的一步,因为它的性质和种类将直接影响实验的效率和结果。根据载体的性质和功能,可以将其分为以下几类: 按进入受体细胞的类型分类: 原核载体:原核细胞(如大肠杆菌)可直接摄取并表达重组体中的外源基因,因此原核载体常被用于原核细胞克...