图1.常见 PCR 克隆策略。 为了进一步简化分子克隆实验流程,已经专门开发了特殊的载体来将插入目的片段,例如,不使用连接酶的载体。这样一类载体包括 Invitrogen™ TOPO™ 克隆载体,其含有共价连接的DNA拓扑异构酶I,可同时作为限制性内切酶和连接酶(...
分子克隆技术是一种在分子水平上操作的技术，用于将特定的DNA片段从供体生物中分离出来，然后通过体外重组、转化和转导等方法，将其插入到适合的克隆载体中，并将重组克隆载体引入到合适的寄主体内进行复制与扩增。最终通过筛选、分离出所需的目的克隆载体，得到多拷贝的目的DNA，从而实现目的基因的扩增。二、涉及研究领...
若想要研究某个人类基因在细胞中的功能,可以使用分子克隆技术克隆该基因,并将其插入细胞中,观察基因表达对细胞功能的影响,从而揭示该基因的功能。 举例二:制备重组蛋白。若需要大量的特定蛋白用于实验或药物研发,可以使用分子克隆技术将目标蛋白的基因插入表达载体中,然后在宿主细胞中大...
单次插入片段:传统分子克隆一轮只能插入一个片段;无缝克隆单个至多个(≤5)。 受限于酶切位点:传统分子克隆是;无缝克隆不是。 引入多余序列:传统分子克隆是;无缝克隆不是。 流程&操作时间:传统分子克隆流程繁琐,时间长。 无缝克隆流程简单,时间短。 克隆效率:传统分子克隆较低;无缝克隆单片段≥95%。 实验流程 1....
传统分子克隆 无缝克隆 传统分子克隆和无缝克隆对比: 单次插入片段:传统分子克隆一轮只能插入一个片段;无缝克隆单个至多个(≤5)。 受限于酶切位点:传统分子克隆是;无缝克隆不是。 引入多余序列:传统分子克隆是;无缝克隆不是。 流程&操作时间:传统分子克隆流程繁琐...
一、实验目的 本实验旨在学习分子克隆的基本原理和操作步骤,掌握DNA片段的提取、连接、转化等关键技术,并通过实验验证分子克隆技术的可行性。 二、实验原理 分子克隆技术是一种在分子水平上操作的技术,用于将特定的DNA片段从供体生物中分离出来,然后通过体外重组、转化和转导等方法,将其插入到适合的克隆载体中,并将重组...
传统分子克隆主要步骤 Figure 1. 传统分子克隆实验流程 载体制备 传统分子克隆方法所用的载体基于质粒,而后者为不依赖基因组 DNA 在细菌内复制的双链游离 DNA。所有基于质粒的克隆载体包含许多关键要素,包括:确保在细菌宿主细胞内能有效增殖的复制原;...
分子克隆(基因克隆/DNA重组/载体构建)技术是一种在分子水平上操作的技术,用于将特定的DNA片段从供体生物中分离出来,然后通过体外重组、转化和转导等方法,将其插入到适合的克隆载体中,并将重组克隆载体引入到合适的寄主体内进行复制与扩增。可以应用于蛋白表达、病毒包装、基因治疗、细胞治疗、mRNA疫苗、RNA干扰、细胞功...
举例一:研究人类基因功能。若想要研究某个人类基因在细胞中的功能,可以使用分子克隆技术克隆该基因,并将其插入细胞中,观察基因表达对细胞功能的影响,从而揭示该基因的功能。 举例二:制备重组蛋白。若需要大量的特定蛋白用于实验或药物研发,可以使用分子克隆技术将目标蛋白的基因插入表达载体中,然后在宿主细胞中大量表达目...
分子克隆(基因克隆/DNA重组/载体构建)技术是一种在分子水平上操作的技术,用于将特定的DNA片段从供体生物中分离出来,然后通过体外重组、转化和转导等方法,将其插入到适合的克隆载体中,并将重组克隆载体引入到合适的寄主体内进行复制与扩增。可以应用于蛋白表达、病毒包装、基因治疗、细胞治疗、mRNA疫苗、RNA干扰、细胞功...