转录的过程和转录后RNA的用途，该方法被称为体外转录法。转录模板必须满足:1. 在基因组全长克隆过程中，在正向引物5/ 端添加T7启动子序列;2. 以T7启动子作为体外转录启动子，在启动子后面靶位序列连续带有3个G,转录效率最 高;3. 在正向引物5/端添加一个帽子G,有利于提高体外转录RNA分子的侵染活性。
mRNA药物生产工艺大致包括质粒生产、质粒线性化、体外转录合成反应(IVT)、mRNA 纯化、LNP 包封五部分。 其中,又以IVT反应最为核心、且关键工艺参数最多。IVT反应以 DNA 为模板,并利用 RNA 聚合酶(例如,T7 RNA聚合酶-T7 RNAP)在体外转录合成。主要...
mRNA药物生产工艺大致包括质粒生产、质粒线性化、体外转录合成反应(IVT)、mRNA 纯化、LNP 包封五部分。 其中,又以IVT反应最为核心、且关键工艺参数最多。IVT反应以 DNA 为模板,并利用 RNA 聚合酶(例如,T7 RNA聚合酶-T7 RNAP)在体外转录合成。主要过程为利用含有 T7 启动子序列的 DNA 为模板在含有 RNA 聚合...
RNA体外转录反应通常用于两种实验目的:合成标记探针,以及合成大量的未标记RNA。另外,转录反应中所合成的加帽RNA可以用于显微注射、体外翻译以及转染等实验。我们的RNA专家开发了专门的核苷酸、聚合酶、修饰酶以及试剂盒,以用于进行加帽RNA高得率转录、大规模转录以及基于短DNA模板...
体外转录(IVT) mRNA再次牵手热门领域 导读:基于“事件驱动”的药理学,蛋白水解靶向嵌合体(PROTAC)技术借助泛素-蛋白酶体系统(UPS)可以实现“不可成药”目标蛋白(POI)的降解,是药物开发的新兴技术。然而,当前在研的PROTAC技术主要有小分子药物和重组蛋...
体外转录的原理 体外转录是生物学中的一个实验技术,用于合成RNA。它是在离开生物体的体外环境中进行的RNA合成。以下是体外转录的基本原理: 1.提取DNA模板: 体外转录的第一步是从生物体中提取需要合成RNA的DNA模板。这个DNA模板通常包含一个特定的基因或基因片段,其序列决定了将要合成的RNA的序列。 2.准备反应体系:...
体外转录(IVT)是一种用于合成长RNA转录本的酶促过程,尽管合成过程很稳健,但也会产生免疫刺激副产物,如dsRNA,已被证明是免疫通路的主要触发因素,影响了mRNA药物的安全性;另外,T7 RNA Polymerase、RNase Inhibitor、Inorganic Pyrophosphatase等工具酶的使用虽然能帮助我们获得大量的RNA,但其本身对于药物成品来说亦是一种...
订购体外 转录siRNA 试剂盒 不要因仅检测少量 siRNA 而限制您的研究 小干扰 RNA (siRNA) 由约 21bp 的双链 RNA 和 3’ 端二核苷酸突出碱基组成,现在常用于在哺乳动物细胞中通过 RNA 干扰途径诱导基因特异性沉默。最有效的 siRNA 能使目标基因表达降低> 90%。遗憾的是,一些 siRNA 只有很轻微甚至可忽略不计的...
DNA 模板作为 mRNA 转录的模板,一般为 PCR 产物或线性化质粒,包含了 T7 启动子、5’UTR、CDS、3’UTR 和 Poly(A)等原件;NTP 作为 mRNA 转录底物,可以通过替换为修饰核苷酸,达到对 mRNA 进行修饰,提高稳定性、免疫原性等目的;无机焦磷酸酶和 ...