转录的过程和转录后RNA的用途，该方法被称为体外转录法。转录模板必须满足:1. 在基因组全长克隆过程中，在正向引物5/ 端添加T7启动子序列;2. 以T7启动子作为体外转录启动子，在启动子后面靶位序列连续带有3个G,转录效率最 高;3. 在正向引物5/端添加一个帽子G,有利于提高体外转录RNA分子的侵染活性。
mRNA药物生产工艺大致包括质粒生产、质粒线性化、体外转录合成反应(IVT)、mRNA 纯化、LNP 包封五部分。 其中,又以IVT反应最为核心、且关键工艺参数最多。IVT反应以 DNA 为模板,并利用 RNA 聚合酶(例如,T7 RNA聚合酶-T7 RNAP)在体外转录合成。主要...
Con1-SPOP mRNA的制备过程包括质粒模板制备、体外转录(IVT)、LNP包封。研究通过细胞凋亡试验、蛋白组分析、流式分析、小鼠异种移植模型评估Con1-SPOP mRNA的抑制活性。 研究结果:研究人员通过体内和体外试验表明,PCNA降解导致DNA损伤、p53激活和细胞凋亡,...
体外转录(IVT, in vitro tranion)是制备mRNA等长链RNA的首选方法,在实验室规模下即可得到μg至mg量级的mRNA。对于科研用户来讲,试剂供应商已摸索出较为通用的IVT反应体系,对于不同长度的RNA(1000~10000 nt)仅需细微调整。但企业用户会考虑工艺放大效应导致的IVT反应体系差异,因此会更加细致地摸索IVT转录比的影响因...
CAP1;帽类似物;CleanCap;体外转录;信使RNA 介绍 合成信使RNA(mRNA)在各种临床应用中显示出作为治疗剂的巨大潜力,例如疫苗和遗传疾病治疗即蛋白质替代疗法、干细胞重编程和基因编辑。合成信使核糖核酸的瞬时表达在此类应用中是可取的因为它避免了病毒系统引起的基因组插入事件的风险。mRNA制造、可扩展性和递送的进步扩大...
Thermo Scientific一步法人体外转录系统是一种从DNA或mRNA模板表达蛋白质的方法,用于在包含细胞翻译机制基本成分的无细胞溶液中进行翻译。永生人类细胞系提取物提供了核糖体、起始和延伸因子、tRNA和其他蛋白质合成所需的基本成分。当补充专有...
RNA体外转录反应通常用于两种实验目的:合成标记探针,以及合成大量的未标记RNA。另外,转录反应中所合成的加帽RNA可以用于显微注射、体外翻译以及转染等实验。我们的RNA专家开发了专门的核苷酸、聚合酶、修饰酶以及试剂盒,以用于进行加帽RNA高得率转录、大规模转录以及基于短DNA模...
1,sgRNA的体外转录模板的设计 适用于CRISPR/Cas9的整条sgRNA长度(包括骨架)大概有110bp,这种长度的片段,我们通常是设计上下游两条引物,两条引物留出20bp的互补片段,后期通过两条引物互为模板进行PCR扩增,生成双链DNA模板。 哈哈,这里因为各种颜色,知乎编辑限制,所以只能截成图片上传了!! 2,转录模板的制备和回收 <...
随着体外转录(IVT)mRNA和脂质纳米颗粒(LNP)技术的成熟和广泛应用,目前PROTAC的研究方向也采纳了IVT mRNA技术。 本期文章,菌菌汇总了IVT mRNA-LNP技术在热门领域PROTAC疗法中的应用潜能。 01 mRNA PROTAC靶向PCNA 题目:Targeted degradation of PCNA outperforms stoichiometric inhibition to result in programed cell...