WesternBlotprotocol实验步骤 Western Blot protocol 主要试剂及缓冲液的配制 1). 30%丙烯酰胺：将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为100ml的⽔中。搅拌器帮助溶解，滤纸过滤除杂质，避光保存于4度冰箱。2). 10% SDS：称量10g⼗⼆烷基硫酸钠，加⼊80ml超纯⽔中，加热搅拌溶解，加⽔...
电泳:上样前将胶板下的气泡赶走,用注射器吸取电泳缓冲液冲孔,可根据实验需要设定阳性对照(即肯定可以表达你的目的蛋白的组织或者细胞,同时可以提示你一抗的质量)或阴性对照(即肯定不会表达你的目的蛋白的组织或者细胞),样品两侧的泳道用等体积的1×loading buffer上样,Marker(Ferments)也用1×loading buffer调整至与...
可用BIO-RAD Trans-Blot Turbo 5x Transfer Buffer (1份 20ml) + ethanol (1份 20ml) + nanopure water (3份 60ml) (需预冷) 2A~2.5A,恒压25V,10min(可根据需要改变条件)BIO-RAD仪器。 2.4 封闭和敷一抗 将PVDF膜放入封闭液(1% milk in 1x TBST 含 0.1% Tween 20;或者3% BSA in 1x TBST 含...
1X Transfer Buffer 10X Transfer Buffer Reagents needed: Reagents needed: 14.4 g glycine 144.1g glycine 3.03 g Tris base 30.2 g Tris base 200 ml methanol - methanol 0.8 L ddH2O http://westernblot.org/western-blot-protocol/western-blot-protocol-buffers/ http://www.bio.davidson.edu/Courses/Mo...
Western_Blot_protocol Western Blot Protocol (一)取材 当天提蛋白，来自cell culture中的传代cell line。1.取种有细胞的六孔板，真空吸去培养液，PBS洗3遍。2.加入裂解液，裂解液配方：1份PI（蛋白质抑制剂，10×原液加PBS稀释至 1×），1份TritonX-100（10×原液加PBS稀释至1×），8份PBS。3.用刮刀把...
Transfer buffer (wet, makes 1000ml) Tris-base 2.43 g Glycine 11.26 g Methanol 200 ml Fully dissolve the compounds and mix. Add water to make up to 1000 ml. Store in dark. ** If the weight of target protein is bigger than 100 kD, we recommend adding 0.04% SDS in transfer buff...
western_blot_protocol fmmuWestern blot实验技术 试剂配制 1. 10%过硫酸胺(AP) 过硫酸胺0.1g 超纯水1.0ml 溶解后,0.1ml分装4℃保存,保存时间为1周。 2.1.5MTris·HCl(pH8.8)lower buffer(下层缓冲液) Tris18.17g 超纯水80ml 浓盐酸调pH至8.8,最后用超纯水定容至100ml,过滤,4℃保存 3.1.0MTris·HCl(pH...
Western blot结果的半定量分析可以利用灰度分析和光密度分析法。 目的蛋白灰度(或光密度)值=目的蛋白灰度(或光密度)/内参蛋白灰度(或光密度) (注:灰度值或光密度值只是一个相对值,不同组间的灰度值对比,反映的是不同组间目的蛋白的变化趋势,并不是绝对定量值。常用...
1、stripping buffer: 62.5mmol/l Tris PH6.7;100mmol/l beta-mercaptoethanol;2%SDS 二次发光protocol:1.stripping buffer洗膜:50度水浴30分钟,摇床上摇10-20分钟。 2、1*PBST洗:摇床上摇30分钟。 3、封闭,加一抗,二抗(同第一次发光) METHOD2
1-1. 5X Running buffer 储存液 (1L) Tris Base 15.1g Glycine 94g SDS 5g pH 调节至8.3 DD water 补足至1L 1-2. 跑胶的时候,将5X 的Running buffer稀释为1X (1L) 5X Running buffer 200ml DD water 800ml 2-1. 10X Transfer buffer 储存液 (1L) ...