在这五年的 western blot 实验历程里,我先后用过进口抗体,进口抗 体国内分装包装,国产抗体,质量良莠不齐。 进口抗体一般不会出现闪失:abcam 品种全,质量过硬,但价高(3400元/100微升) ,而 且说是100微升,但至多能吸出来90微升;Sigma 的价最贵;比较有性价比的是 CST 的抗 体,现在好像是2200元/100微升,我...
在这五年的western blot实验历程里,我先后用过进口抗体,进口抗体国内分装包装,国产抗体,质量良莠不齐。 进口抗体一般不会出现闪失:abcam品种全,质量过硬,但价高(3400元/100微升),而且说是100微升,但至多能吸出来90微升;Sigma的价最贵;比较有性价比的是CST的抗体,现在好像是2200元/100微升,我前后用过二十几种, ...
五年的westernblot经验总结(附abcam的wb的protocol) 交流 原创与否- 本帖最后由mche2005于11-1-210:59编辑 1.抗体的选择 对于国内的大多数实验室来讲,做westernblot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很简 单,买进口抗体捉襟见肘,买国产抗体得需要大无畏的勇气,对于我所在的兰州地区的实验 者而言,感触尤深。在...
蛋白质免疫印迹(Western Blot )作为最基础分子实验,是每一位实验小白必修技能。western Blot有以下范围应用:(1)从蛋白质混合物中检出目标蛋白质;(2)定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况;(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。 下面小编供上的是Abcam经典Western Blot protocol,...
做Western blot实验,一抗非常非常重要。如果一抗选择的不好,神仙也做不出来Western。进口的抗体太贵;国产的抗体不好用。进口抗体一般不会出现问题。市场上知名的几家公司,包括ABCAM,Sigma,CST,Santa Cruz等公司,质量都不错。进口抗体国内分装和国产抗体,质量实在不敢恭维。让人已经无力吐槽。
Transfer of high molecular weight proteins using the iBlot 2 Gel Transfer Device wb实验中没有信号条带可能的原因? 1)样本里是否含有目标蛋白;目标蛋白的表达丰度是否在检测范围之内; 2)一抗和二抗是否匹配? 3)一抗和二抗的浓度是否足够? 4)检查抗体是否能够识别样本种鼠中的目标蛋白?
12)抗体质量:换兴誉好的品牌抗体公司,如CST、Millipore、Abcam等 2、有杂带或背景的原因 1)目的蛋白有多个修饰位点,本身可以呈现多条带,建议查阅文献或进行生物信息学分析,获得蛋白序列的修饰位点信息,通过去修饰确定蛋白实际大小 2) 样本处理过程中目的蛋白发生降解,建议加入蛋白酶抑制剂;样本处理时在冰上操作 ...
简单来说,Western blot就是用于半定量蛋白,将不同组的蛋白一起跑胶,发光,比较不同组别目的蛋白相对变化。过程繁琐,耗时之长。稍微一个细节不注意,就辛苦白费,得全部重新来过。。。以下图片是否似曾相识。。? 那么,凑字数环节(划掉)打击环节结束,我们进入正文,本篇主要是讲需要注意的细节,和可以备选的方案。
Western Blot膜封闭液适用于 Western Blot实验中PVDF膜或NC膜等转印膜的封闭。封闭后,可以减小后续的一抗或二抗和膜的非特异性结合,降低背景,增强信噪比,以达到理想的显色效果。 按照每张膜封闭需要5~10毫升封闭液计算,一个包装的Western封闭液可以封闭 10~20张膜。
蛋白质是调节机体生理水平的重要指标,因此蛋白质在病理研究中起着至关重要的作用,同时蛋白质对于临床和学术研究也有重大意义。Western Blot是运用免疫学的方法能对蛋白质进行定性和定量分析的一项重要技术,所以运用Western Blot的技术不仅对临床应用有重要意义,而且同时也能为学术研究提供更有效的信息。