电流:恒流170 mA 时间:每0.5 mm转30 min,1.5 mm超厚胶转1.5-2 h 转膜液:10 mM碳酸氢钠,3 mM碳酸钠,20%甲醇🧪 组织蛋白 膜类型:PVDF膜 孔径:0.45μm 转膜方式:湿转 设备:Bio-Rad 电流:300 mA 恒流 时间:170 min🐀 大鼠蛋白 膜类型:PVDF膜 孔径:0.45μm 转膜方式:湿转 设备:北京六一 电流:恒...
5⃣️制作三明治夹心,将黑色三明治夹放置在托盘中,依次放上纤维衬垫、两层滤纸、凝胶、PVDF膜,层层对齐,不留气泡; 6⃣️合上转膜夹,放入转膜槽中黑对黑,白对红,电极同色相对,加满转膜液,同色的电极相对连接电源; 7⃣️转膜槽放入盆中,放满冰块,200mA恒流电转移2h(Bio-rad 湿转); 转膜注意降温,...
1.转膜液建议每次实验重新配,以保证转膜效率。 2.一般转膜为低温环境,因此转膜液应在整个实验开始时进行配置,配置完成后放置在冰盒中。 3.转膜开始前,可将pvdf膜在甲醇溶液中浸泡以激活正电荷;可将转膜夹、滤纸、海绵提前放在废弃转膜液(可以是使用一次后回收的转膜液)中浸泡,上述过程提前2-3min即可,甲醇具有挥发...
然后将转移电泳芯放入转膜槽中,加入足够的转膜缓冲液,确保夹套完全浸没在缓冲液中。设置转膜电流为恒流,220 mA,根据蛋白大小不同设置转膜时间 (一般 30 kDa 以下转 30 min,30-70 kDa 转 60-90 min,70-150 kd 转 90-180 min);(6) 转膜后处理:转膜完成后,取出 PVDF 膜,用 TBST 冲洗膜表面,进行封闭等后...
15. 做Western Blot实验时，发现转膜时的电流总是偏小，转膜的效率也偏低. 100V恒压转膜时的电流只有190mA左右，而以前都有250mA。体系和条件都和以前一样，只是环境温度比以前低了很多。解答：有可能重复使用了转移缓冲液，随着离子的逐渐减少，电阻越来越大，当然恒压时电流越来越小了。建议更换转移缓冲液。反复...
除了抗体原因,转膜恐怕是 western blot 成败的最关键因素。 汇总了一系列分子量蛋白转膜的内容,希望对大家有用。【持续更新,有补充的或者想要问的可以评论区说一下】 蛋白来源:RAW264.7 总蛋白 蛋白名称(可保密):一些转录因子 蛋白分子量:40~70 KD WB用膜类型、孔径:0.4...
15. 做Western Blot实验时,发现转膜时的电流总是偏小,转膜的效率也偏低. 100V恒压转膜时的电流只有190mA左右,而以前都有250mA。体系和条件都和以前一样,只是环境温度比以前低了很多。 解答:有可能重复使用了转移缓冲液,随着离子的逐渐减少,电阻越来越大,当然恒压时电流越来越小了。建议更换转移缓冲液。反复使用...
转膜:准备工作半小时以上,转膜一般2小时。一般转膜恒流250mA,2h左右。 封闭:1小时左右,室温。 孵育一抗:4度摇床过夜。或者4度过夜,第二天室温摇床1小时。 洗膜+孵育二抗:室温,摇床1小时以上。 洗膜+显影:半小时以上。 然后,实验失败...
Western blot 实验中，转膜的最佳条件因蛋白分子量、膜类型、转膜方法等因素而异，以下是一些常见的最佳条件参考：转膜方法及设备 湿转法：是比较常用的方法，较为稳定。一般使用转膜槽，将转膜夹放入转膜槽中，确保阴极板连接到缓冲槽的负极，阳极板连接到正极。转膜过程中，可将加满转膜缓冲液的转印槽置于冰浴中...
Western blot是实验阶段最重要、最基础的实验,其实验步骤较多,所需时间较长,整个实验过程变量较多,是一个既简单又复杂的实验过程。今天主要分享转膜阶段常见问题及经验。 经验: 1.转膜液建议每次实验重新配,以保证转膜效率。 2.一般转膜为低温环境,因此转膜液应在整个实验开始时进行配置,配置完成后放置在冰盒中。