WB,是Western blotting的缩写,即蛋白质印迹法,又称免疫印迹(immunoblotting),也就通过电泳技术分离不同组分,再采用印迹技术将蛋白质转移(“印”)到特定的膜上,再利用抗原-抗体的特异性结合原理,用抗体作为探针去实现检测复杂样品中的靶标蛋白的方法,这项技术也可以用来检测不同时期蛋白表达的水平以及蛋白相互作用等...
吸显影液滴在膜上,确保显影液浸润到了膜所有地方;3、image Lab曝光步骤:膜放置皿中(小口径玻璃皿中)—打开仪器(image lab),膜放入机器—选择印迹—colorimetic—自动曝光—拍白光圈4、曝光拍照(CHEMI)—选择“放置凝胶”——设置曝光时间(自动or手动)—凝胶成像—保存注意:一抗原液(1:1000)稀释,若显影条带...
材料准备:蛋白样品、SDS-PAGE胶、转膜膜(PVDF或NC膜)、一抗/二抗、电泳仪、转膜仪、显影设备等。 安全防护:戴手套、穿实验服,避免接触有毒试剂。 二、实验步骤蛋白样品制备 提取蛋白:裂解细胞或组织,提取总蛋白(如用RIPA裂解液)。 测浓度:用BCA试剂盒测蛋白浓度,调整到相同浓度。 煮蛋白:加Loading Buffer,煮沸...
答案:免疫印记技术(Western blot)的实验步骤如下: (1)蛋白质样品的制备:提取待测蛋白质,进行SDS-PAGE电泳; (2)转膜:将电泳后的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上; (3)封闭:用脱脂奶粉或BSA封闭膜上的非特异性结合位点; (4)抗体孵育:将膜与特异性抗体孵育,形成抗原-抗体复合物; (5)洗涤:洗涤去除未结合的抗体;...
Western Blot的“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)按蛋白大小分离蛋白质样品,随后将其转移到硝酸纤维素膜上。分别用一抗、二抗孵育硝酸纤维素膜,形成蛋白质-第一抗体-第二抗体复合物。然后用信号分子(显色、化学发光或荧光)直接检测抗体,或用标记的二抗间接检测抗体。📝...
一、转膜 这一步是将蛋白质转移至固相载体上，常用固相材料有NC膜、PVDF膜等。常用湿法或半干法转模。这一实验步骤中要戴一次性PE手套，防止手上的蛋白污染膜。1、湿转 （1）转印缓冲液：Tris 5.8g、甘氨酸2.9g、10%（v/v）甲醇、SDS 0.37g、甲醇200ml使用蒸馏水定容至1L，pH 8.3，4℃保存。（2）...
这一步方法各异,具体步骤请参考试剂盒的说明书即可。蛋白质的样品制备是Western Blot的第一步,样品制备是关键步骤,要求尽可能的获得所有蛋白质,应注意以下问题: > 在合适的盐浓度下,应保持蛋白质的最大溶解性和可重复性。 > 选择合适的表面活性剂和还原剂,破坏所有非共价结合的蛋白质复合物和共价键二硫键,使其...
Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测.对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测. 一、原理 与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗....
Western blot 步骤 1、配制裂解液 1mlRIPA+10ul蛋白酶抑制剂+ 10ul磷酸化酶抑制剂(100:1:1比例,需要多少配多少就配多少裂解液) 2、将培养瓶中的细胞用4℃冰冻的 PBS 液冲洗两遍 (冰冻的PBS液是为了保持细胞的活力) 3、加入裂解液(六孔板每孔加60-80uRIPA)冰上裂解30min,之后刮取细胞,培养瓶 100ul/...
常用于 Western Blot 和 ELISA 的抗体封闭步骤,可在 15 分钟内完成封闭。 PBS-T 速溶颗粒 (1 L of 1×) 常用作 ELISA、Western Blot 等免疫分析实验中的洗涤缓冲液,也可用于抗体稀释及封闭液的配制。 TBS-T 速溶颗粒 (1 L of 1×) 常用作免疫组化...