Western Blot显色方法总体上可以分为:放射性显色法,酶标显色法和荧光显色法。各种方法有各自的优缺点。 1. 放射性显色法 首先介绍的是使用放射性同位素标记的二抗。碘-125是一种很受欢迎的放射性同位素选择,具有相对较长的半衰期和释放的伽马射线,伽马射线由低能光子组成,可以使用X射线胶片轻松探测到。它曾经是...
酶促反应较生物素安全且反应快速,是WB中的主流显色方法。酶促反应根据不同底物显色方法又包括化学发光和底物显色。化学发光法灵敏度高,可以达到pg级,而底物显色由于直接显色而操作简单且成本低。最为大家所熟悉的底物显色当数HRP(辣根过氧化物酶,Horseradish Peroxid...
Western Blot(WB)又称蛋白质免疫印迹法,是基于蛋白质SDS-PAGE电泳分离和特异性抗体识别蛋白的特性,通过显色技术检测目的蛋白的技术。该技术主要应用于以下场景:(1)检测目标蛋白;(2)定量或定性地确定细胞或组织中蛋白质的表达;(3)用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA和蛋白质-RNA相互作用的后续分析。实验步骤多...
显影 Western Blot实验的最后一步,是显影。拿到高特异性、低背景的显色图像,将为实验结论提供强有力的佐证。显色的原理是实验中的二抗被HRP(辣根过氧化物酶)标记,可采用增强化学发光法(ECL)。ECL灵敏度高、重复性好,是目前主流的WB显色方法。 图一、全自...
方法/步骤 1 首先我们经过一天的western blot将样本指标转移到裁剪好的PVDF膜上准备显色。2 这个时候会发现膜的位置全是黑色，并且有些部分是白色。3 黑色的部分是显色液不足导致的，白色是因为浓度太高所以要降浓度。4 我们重新配好显色液，然后滴加到PVDF膜上，正反都加一遍，注意避光操作。5 在滴加的时候...
一、转膜 这一步是将蛋白质转移至固相载体上，常用固相材料有NC膜、PVDF膜等。常用湿法或半干法转模。这一实验步骤中要戴一次性PE手套，防止手上的蛋白污染膜。1、湿转 （1）转印缓冲液：Tris 5.8g、甘氨酸2.9g、10%（v/v）甲醇、SDS 0.37g、甲醇200ml使用蒸馏水定容至1L，pH 8.3，4℃保存。（2）...
Western化学发光检测常见问题及解决方法 #玩转AI摘要# 底物化学发光ECL是Western blot最常用的显色方法之一，其原理是辣根过氧化物酶在H2O2的作用下，氧化化学发光物鲁米诺（Lumino）并发光，在化学增强剂存在下光强度可以增大1000倍，通过在照相底片上感光就可以检测辣根过氧化物酶的存在。这种化学发光反应不仅被广泛用于...
1、Western Blot显色篇WB蛋白印迹在生物化学这一块是常规实验,就像有人说炒菜中境界最高也最难的是蛋炒饭一样, 实验中常规实验也是很考验技能的,除了潜心研究原理、认真揣摩技巧以外,对于新实验试剂的信息把握, 勇于尝试新方法也是非常之重要的各大厂家都在不断开发更方便更灵敏的新产品,“ idea 是生产力”嘛,...
标签:westernblot显色教育 一、 原理 与Southern或Northern杂交方法类似,但WesternBlot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性...
常见Western Blot显色的方法主要有:放射自显影、底物化学发光ECL、底物DAB呈色,荧光WB实验步骤跟传统WB差异不大,最主要的差别在于二抗:传统WB检测二抗是酶标记,而荧光WB的二抗是荧光标记的,省去了繁杂的显影,照胶等步骤,取而代之的是利用荧光成像仪直接成像。