没有好的成像结果,往往就分析不出好的结果,这方面具体可以参考之前的这篇文章: ImageJ实用教程——成像注意事项178 赞同 · 9 评论文章 对于Western Blot的成像阶段来说,最需要注意的两个因素:上样量以及曝光问题。 1、上样量 我们在做Western Blot定量时,我们的基本假设是样品浓度和条带之间是线性关系[1]: ...
目前Western Blot条带进行数值化有两种方法——灰度分析和光密度分析。 灰度是计算机图像分析仪根据图像颜色深浅分为256个级别,灰度值越小物体颜色越深。光密度是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度IO与该光线通过溶液或物质后的透射光强度Ib比值的对数OD=log(IO/Ib);图像分析中,入射光和透射光强度分别被切片...
经验：上图展示的是一点信号都没有，如果是这样大部分情况是抗体加错了。如果中间出现了细微的条带，可能原因是蛋白上样量太少，一抗浓度过低，ECL发光液失效。另外如果转膜出现了问题，比如膜放反了，自然是一张白片。02.高背景 原因：封闭不够好，一抗浓度高，洗膜时间和次数不够；解决办法：降低一抗浓度，增...
Western Blot的基本原理是蛋白质通过凝胶电泳后,按分子量大小顺序在分离胶中分离开来,通过转膜可将胶上蛋白质转移到固相载体(通常是PVDF膜、NC膜和尼龙膜)表面,然后加入一抗去特异性结合膜上蛋白质,再加入酶或者荧光素标记的二抗,二抗与一抗结合反应后,通过底物显色、化学发光等方法检测目的蛋白。Western Blot实验一...
1、 Western Blot Western Blot Western Blot 简介: p印迹法(blotting)是指将样品转移到固相载体上,而后利 用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 p1975年,Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜(NC 膜)上,并利用DNARNA杂交检测特定的DNA片段的方 法,称为Southern印迹法。 p而后人们用类似的方法,对RNA和...
i.泳道-轨迹测定法:过程:先剔除一系列背景,再选择泳道(lane),然后分析条带(band),最后使用高斯建模得出灰度分析值(Gauss Model trace)特点:感觉比较科学,重复性好,但十分繁琐,而且有时不能正确反应灰度(我亲测过)ii.等高线-手绘选取目的区域测定法:通过等高线或手绘选取目的蛋白区域,最简便,但重复性不太好。(3...
【6】图像分析:通过图像分析软件,我们可以对显色结果进行定量和定性分析。通过比较不同样本的条带强度和位置,我们可以了解蛋白质的表达水平和种类。 western blot表达水平检测 二、Western Blot结果解读 (1)阳性结果:如果膜上出现预期的条带,则表明目标蛋白质存在于样品中。这可能是由于目标蛋白质的过表达、突变或其...
Western Blot(简称WB),蛋白质免疫印迹法,是基于蛋白质SDS-PAGE电泳分离和特异性抗体识别蛋白的特性,通过显色技术,以达到检测目的蛋白的技术。该技术广泛应用于定性检测蛋白水平的表达,活性分析与鉴定。该实验步骤多,关键点多,耗时长,每个步骤可能都影响最终的结果...
本文介绍分析Western Blot中结果条带的各种稀奇古怪。 在黑暗的发光室中慢慢等待,只为最后胶片上最好看的你! 1. 啥也没有 原因:比较多,如果单纯一张没有任何显色的X光片,最可能是一抗加成其他抗体,或者二抗种属加错了,比如兔的加成鼠的。 解决办法:...
Western Blot(WB)分析法Western 实验目的 检测目的蛋白的表达情况。 实验原理 Western Blot(WB)采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体上,例如硝酸纤维素薄膜(NC膜),固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽...