这篇文章是为了解决这一问题,不仅仅从结果,也从原理出发,系统介绍Western Blot定量分析的正确流程。 一、上样和成像阶段 在进行Western Blot定量时,我们往往会过多关注分析阶段,而往往忘记了更加重要的上样和成像阶段。 没有好的成像结果,往往就分析不出好的结果,这方面具体可以参考之前的这篇文章: ImageJ实用教程...
目前Western Blot条带进行数值化有两种方法——灰度分析和光密度分析。 灰度是计算机图像分析仪根据图像颜色深浅分为256个级别,灰度值越小物体颜色越深。光密度是指光线通过溶液或某一物质前的入射光强度IO与该光线通过溶液或物质后的透射光强度Ib比值的对数OD=log(IO/Ib);图像分析中,入射光和透射光强度分别被切片...
Western Blot(WB)分析法Western 实验目的 检测目的蛋白的表达情况。 实验原理 Western Blot(WB)采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体上,例如硝酸纤维素薄膜(NC膜),固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽...
下面是Western blot的基本步骤和注意事项: 一、实验步骤 蛋白样品制备:从细胞或组织中提取蛋白质样品,常用的方法有细胞裂解、组织匀浆等。 蛋白定量:使用BCA蛋白浓度测定法等对蛋白质样品进行定量,以便后续的Western blot分析。 凝胶电泳:将蛋白质样品在聚丙烯酰胺凝胶中电泳分离,根据蛋白质的大小和电荷进行分离。 转膜...
WB(Western Blot,蛋白免疫印迹)是一种常规的蛋白分析技术,常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。 WB实验的基本核心理念是抗原抗体的特异性反应,通过变性胶 SDS-PAGE 将不同分子量的蛋白质分离开,然后转移到固相载体 PVDF 膜上,再用脱脂牛奶作为封闭液进行封闭和一抗稀释液进行稀释。待目的蛋白和抗体...
研途指南:western blot(WB)蛋白条带处理及数据量化 PS处理条带-ImageJ量化条带-Graphpad统计作图,一次搞定科研三巨头。 3.0万 29 12:56 App WB量化数据计算比值及归一化值,SPSS对数据进行统计分析 2.2万 1 03:03 App western blot蛋白条带数据量化组图背景处理课程简介 2103 0 02:35 App wb数据处理分析 第...
1、 Western Blot Western Blot Western Blot 简介: p印迹法(blotting)是指将样品转移到固相载体上,而后利 用相应的探测反应来检测样品的一种方法。 p1975年,Southern建立了将DNA转移到硝酸纤维素膜(NC 膜)上,并利用DNARNA杂交检测特定的DNA片段的方 法,称为Southern印迹法。 p而后人们用类似的方法,对RNA和...
Western blot,就是WB,蛋白质免疫印迹试验,是对目的蛋白进行检测的一种实验方法,大致分为以下7步:蛋白提取、蛋白定量、SDS-PAGE电泳、电转膜、封闭孔洞、抗原-抗体免疫反应、蛋白检测。 02 结果分析 研究组和对照组相比,2个屁、3个屁、4个屁处理以后,蛋白质...