一、试剂准备 SDS-PAGE试剂:见聚丙烯酰胺凝胶电泳实验。 匀浆缓冲液:1.0 M Tris-HCl(pH 6.8) 1.0 ml;10%SDS 6.0 ml;β-巯基乙醇 0.2 ml;ddH2O 2.8 ml。 转膜缓冲液:甘氨酸 2.9 g;Tris 5.8 g;SDS 0.37 g;甲醇200 ml;加ddH2O定容至1000 ml。 0.01 M PBS(pH7.4):NaCl 8.0 g;KCl 0.2 g;Na2HPO4 1...
3)一般来说,7.5ml分离胶+2.5ml浓缩胶即可配制1块SDS-PAGE胶(厚度1.5mm)胶。分离胶和浓缩胶在室温下,大约需20min固定成型。在制备SDS-PAGE电泳胶时,初学者极易制成笑脸型胶,导致WB条带不平,笔者的经验时加完分离胶后,用1ml*头沿厚玻璃板缓慢、匀速、连续滴加ddH2O或无水乙醇,压平分离胶;最好的是液体滴...
一、 蛋白胶配置(SDS-PAGE) 1. 材料准备 30%丙烯酰胺; ddH2O; 1.5M pH6.8 Tris-Hcl; 0.5M Tris-Hcl pH8.8; 10% SDS; 10% APS(超一月不能用); TEMED; 异丙醇原液; 玻璃板; 蛋白胶胶架 2. 玻璃板准备及胶架安装 1) 将长、短玻璃板洗净,并用蒸馏水冲洗,冲洗后立在吸水纸上,晾干水分; 2) 长...
7TBST(Tris-buffered saline with Tween20)的配置 10×TBS 100 ml 200 ml Tween20 1 ml 2 ml 双蒸水 溶解至1000 ml 溶解至2000 ml 室温储存。 8 上样缓冲液(loading buffer)的配置 SDS-PAGE加样缓冲液:pH6.8 0.5mol/L Tris缓冲液8ml,甘油6.4ml,10%SDS 12.8ml,巯基乙醇3.2ml,0.05%溴酚蓝1.6ml,H2O...
一、试剂准备 1）10x 电泳液：Tris Base 30.3g、Glycine 144g和SDS 10g，量取800ml ddH20，充分搅拌溶解后，定容至1L；2）10x 电转液：Tris Base 30.3g、Glycine 144g，量取800ml ddH20，充分搅拌溶解后，定容至1L；3）1x 电泳液：10x 电泳液100ml，加水定容至1L；4）1x 电转液：10x 电转液100ml，...
1. 试剂配置与选择电泳液: 以100ml为基准，准备Tris 3.03g, 甘氨酸 18.8g, SDS 1g。转膜液: Tris 3.03g, 甘氨酸 14.4g, 800ml ddH2O和200ml甲醇混合。TBST(10×): Tris 12.1g, NaCl 40g, 500ml ddH2O。2. 实验步骤详解a. 配制和制胶使用雅酶配胶盒，根据样本选择胶浓度：7.5%（30...
三、SDS-PAGE电泳 1.配胶(12%,可以提前配好) 准备:玻璃板,梳子,AP(解冻,现拿现用),聚丙烯酰胺(4℃冰箱冷藏) (1)玻璃板验漏5min (2)按表配置分离胶 (3)灌胶,加酒精封压,凝30min(注意不要有气泡) (4)按表配浓缩胶,倒掉酒精,用吸水纸吸去酒精,灌胶,插梳子(注意不要有气泡),凝30min (5)取胶...
比如,伯仪生物ACE品牌的全新一代FuturePAGE™蛋白预制胶,它需要使用配套的MOPS-SDS Running Buffer电泳液,然后:蛋白电泳时,电压不要超过180 V,建议方案160 V,45-50 min。现实是,我发现,160V,不到30分钟就跑完了。 相关操作视频: 全新...
保存。此液体用来配置TBS缓冲液,用来漂洗上抗体后的膜 17.4mg/ml (100mmol/L)PMSF PMSF 0.174g+异丙醇10ml溶后,分装1.5ml离心管,室温 0.2mol/L NaH2PO4NaH2PO4(MW119.98) 12g+蒸馏水至500ml 溶解后,室温保存。 0.2mol/LNa2HPO4Na2HPO4·12H2O(MW 358.14) 71.6g+蒸馏水至1000ml 溶解后,室温保存。10%SDS SDS...