可能原因:膜污染、显色剂残留或操作不当。 解决方案:确保膜干净无污染,充分洗涤显色剂残留,并严格按照操作说明进行实验。🔟 Marker变黑 🖤 可能原因:Marker浓度过高或显色时间过长。 解决方案:降低Marker浓度,缩短显色时间。遇到这些问题不要慌,按照这些解决方案一步步排查,相信你能顺利完成WB实验!💪0 0 发表...
应减少显色剂用量或缩短显色时间。 背景有黑色斑点:背景上的黑色斑点可能由膜污染、显色剂残留或操作不当引起。应确保膜干净无污染,充分洗涤显色剂残留,并严格按照操作说明进行实验。 Marker变黑:Marker变黑可能由Marker浓度过高或显色时间过长引起。应降低Marker浓度或缩短显色时间。 实验外包的优势 除了自己进行WB...
所有预染蛋白Marker的表观分子量都会因缓冲条件的不同而发生变化，所以应根据所用凝胶体系使用相匹配的表...
点击“放置凝胶”,调整条带位置,直接保存为软件格式的ptl文件或截图保存为jpg格式。 拍marker步骤 在Image Lab软件中,选择“起始页-新建-应用程序-印迹”,然后选择第四个分折表。 不需要设置信号累计模式,直接点击“放置凝胶”,保存图片。 合并marker和条带 打开Image Lab软件,确保两张图片同时在软件里。 选择左侧...
- 抗体或二抗加入过多:稀释抗体浓度或显影液浓度。4️⃣ marker条带呈黑色 - 抗体与marker反应:在分子量蛋白标准和第一个样品之间增加一个空白条带。5️⃣ 目的条带染色过低/过高 - 分离不彻底:改变凝胶比例,大分子蛋白用低浓度胶,小分子蛋白用高浓度胶。6️⃣ 相同蛋白杂交出现大小不均匀条带 ...
观察预染Marker,没有Marker条带(一条都看不到)可能的原因: ①考虑电极是否插反,若是,需要重新进行电泳及转膜; ②使用的是PVDF膜,要考虑转膜前是否使用无水甲醇进行了活化。 转膜不充分(小条带在膜上,大条带在胶上)的可能原因有: ①转膜时间过短,需适当延长转膜时间; ...
倒分离胶时不能太多 封液面时要轻快 出现分离液面再倒水并用滤纸擦干,小心滤纸碰到胶 快速倒堆积胶,插梳子,小心液体呲出💧 上样准备: 准备上样用的样品(涡旋、离心),marker,移液枪,插枪头 上样时注意记住蛋白顺序,调量程🏃♂️ 跑胶过程: ...
蛋白转移不到膜上，但胶上有，同时Marker 转上去了。为什么？答：可能是：a)样品浓度过低；b)转移时间不够。12 磷酸化抗体的检测样本制备时是否一定要加NaF等？答：NaF是一种广谱磷酸化酶的抑制剂，一般最好加。但是不加也可以，大部分时候是不用加的。13 要验证某个细胞上有无该蛋白的存在，需要做免疫组化...
marker应该在转完膜孵育抗体之前就可以看到是否成功转至膜上了。在显影时，如果用的是带有CCD相机的仪器...