可能原因:膜污染、显色剂残留或操作不当。 解决方案:确保膜干净无污染,充分洗涤显色剂残留,并严格按照操作说明进行实验。🔟 Marker变黑 🖤 可能原因:Marker浓度过高或显色时间过长。 解决方案:降低Marker浓度,缩短显色时间。遇到这些问题不要慌,按照这些解决方案一步步排查,相信你能顺利完成WB实验!💪0 0 发表...
所有预染蛋白Marker的表观分子量都会因缓冲条件的不同而发生变化，所以应根据所用凝胶体系使用相匹配的表...
应减少显色剂用量或缩短显色时间。 背景有黑色斑点:背景上的黑色斑点可能由膜污染、显色剂残留或操作不当引起。应确保膜干净无污染,充分洗涤显色剂残留,并严格按照操作说明进行实验。 Marker变黑:Marker变黑可能由Marker浓度过高或显色时间过长引起。应降低Marker浓度或缩短显色时间。 实验外包的优势 除了自己进行WB...
点击“放置凝胶”,调整条带位置,直接保存为软件格式的ptl文件或截图保存为jpg格式。 拍marker步骤 在Image Lab软件中,选择“起始页-新建-应用程序-印迹”,然后选择第四个分折表。 不需要设置信号累计模式,直接点击“放置凝胶”,保存图片。 合并marker和条带 打开Image Lab软件,确保两张图片同时在软件里。 选择左侧...
观察预染Marker,没有Marker条带(一条都看不到)可能的原因: ①考虑电极是否插反,若是,需要重新进行电泳及转膜; ②使用的是PVDF膜,要考虑转膜前是否使用无水甲醇进行了活化。 转膜不充分(小条带在膜上,大条带在胶上)的可能原因有: ①转膜时间过短,需适当延长转膜时间; ...
- 抗体或二抗加入过多:稀释抗体浓度或显影液浓度。4️⃣ marker条带呈黑色 - 抗体与marker反应:在分子量蛋白标准和第一个样品之间增加一个空白条带。5️⃣ 目的条带染色过低/过高 - 分离不彻底:改变凝胶比例,大分子蛋白用低浓度胶,小分子蛋白用高浓度胶。6️⃣ 相同蛋白杂交出现大小不均匀条带 ...
以前也出现过这种情况，问题不清楚，因为这里的太多可能出错的地方了 1)就像你说的抗体浓度问题，不过我觉得这里问题不是太大 2）你检测的东西的浓度问题，如果表达很低的话，曝光时间久要长了，但是你显影之后一点都没有的话，就有问题了。
上样及电泳:先加入Buffer,然后依次加入样品,最后加入2～3 μL 的Marker。 打开电源,调至电压至 100V,待 Marker 条带分明时,然后将电压调至 150V,至 Marker 中的红色条带跑到下面为止。 转膜: 膜需要先用甲醛进行活化,电转液需要提前配置进行预冷。转膜之前膜和胶之间不要有空隙。
marker应该在转完膜孵育抗体之前就可以看到是否成功转至膜上了。在显影时，如果用的是带有CCD相机的仪器...