样本准备:15ul样本和5ulMarker,电泳液新鲜配置是关键。电泳时间根据最小分子量蛋白来定,比如15kDa的蛋白,电泳时间要足够长。🔄 转膜步骤:转膜液提前4℃保存,注意黑胶白膜的放置,避免反转。转膜时间根据最大蛋白分子量来定,加冰盒和冰块降温。🥛 封闭液准备:5%脱脂奶粉(20mlTBST+1g奶粉),封闭1～2小时后,用TBST...
5⃣️ TBST/PBST👉1000ml 1*TBS/1*PBS + 1ml吐温20(1*TBS/1*PBS:吐温20=1000:1) 6⃣️ 封闭液👇 A:5%BSA👉2g BSA + 40ml TBST/PBST + 30ul抑菌剂(根据说明书比例) B:5%脱脂奶粉👉2g奶粉 + 40ml TBST/PBST + 30ul抑菌剂(根据说明书比例) C:快速封闭液👉直接购买使用(市面上有...
试剂配制(转膜开始之后就可以配) 1XPBST(0.02%):1L PBS+2mL Tween 20,充分混匀后室温存放; 5%的脱脂奶粉(现配现用):称量2.5g脱脂奶粉到1XPBST中,充分涡旋混匀,4℃保存备用; 封闭:取出转膜成功的PVDF膜,放置于5%脱脂奶粉中,室温摇床封闭1h; (封闭的作用:用大分子物质封闭非相关的蛋白结合位点,降低抗体与膜...
尝试不同的封闭液组合（如1% BSA与5%奶粉混合）进行封闭，以求降低背景。增加封闭时间，尤其是在4°C下进行过夜封闭。完善洗涤步骤：增加洗涤轮数与时间，如在抗体孵育后，设置3-5次洗涤，每次10分钟，确保充分去除未结合的抗体。确保洗涤液中Tween-20浓度达到0.1%-0.5%。使用新鲜的PBST，并保持洗液温和，尽量轻...
试剂配制(转膜开始之后就可以配) 1XPBST(0.02%):1L PBS+2mL Tween 20,充分混匀后室温存放; 5%的脱脂奶粉(现配现用):称量2.5g脱脂奶粉到1XPBST中,充分涡旋混匀,4℃保存备用; 封闭:取出转膜成功的PVDF膜,放置于5%脱脂奶粉中,室温摇床封闭1h; (封闭的作用:用大分子物质封闭非相关的蛋白结合位点,降低抗体与膜...
室温下,将转好的膜于摇床上用 5% 的脱脂牛奶 (TBST配制),磷酸化蛋白检测用 5% 的 BSA (TBST配制) 缓冲液,室温封闭 1-2 h。 封闭液的主要作用是占据非目标结合位点,降低背景信号,从而提高检测的特异性和灵敏度。常用的封闭液:脱脂奶粉、牛血清白蛋白 (BSA)。那么封闭液应该如何选择呢?
1,封闭(5%的脱脂奶粉)一小时,室温下摇床上进行。 2,TBS/T洗膜3次,每次5分钟。用滤纸去尽残液。 3,孵育一抗(cell signaling,单克隆抗体),比例是1:1000(说明书上标示)。先室温摇床上1小 时,再放在4度冰箱过夜。 4,TBS/T洗膜3次,每次5分钟。用滤纸去尽残液。 5,孵育二抗(博士德),比例是1:5000(我...
4.封闭推荐用5%脱脂奶粉配置在1*TBST里,若是荧光WB,封闭液里不加 Tween20。 5.抗体孵育与检测,一定要选择如CST这般严格筛选的特异性、灵敏度、可重复性等都表现优异的抗体才能帮助老师得到可靠的结果。 17楼2023-12-19 20:12 回复 登录百度账号 下次自动登录 忘记密码? 扫二维码下载贴吧客户端 下载贴吧APP看...