试剂配制(转膜开始之后就可以配) 1XPBST(0.02%):1L PBS+2mL Tween 20,充分混匀后室温存放; 5%的脱脂奶粉(现配现用):称量2.5g脱脂奶粉到1XPBST中,充分涡旋混匀,4℃保存备用; 封闭:取出转膜成功的PVDF膜,放置于5%脱脂奶粉中,室温摇床封闭1h; (封闭的作用:用大分子物质封闭非相关的蛋白结合位点,降低抗体与膜...
1)胶凝的不均匀或聚合不好,建议灌胶前将溶液充分混匀2)某些样品盐浓度较高,建议除盐或将样品盐浓度调成一致3) 缓冲液陈旧,成分改变,可以重配4) 凝胶下面有气泡,电泳前要先将气泡赶走5)电泳时温度过高,可以降低电流或电压6)样品中含有不溶性颗粒,建议样品充分搅拌混匀4、蛋白条带位置(大小)不对咋整?胶浓度...
【5】我把你的步骤改了一下。供参考。 1,半封闭(5%的脱脂奶粉)4小时,室温下摇床上展开。(表明:半封闭就是很关键的一步,这步必须多话时间。一般来说,2小时也可以的,但是1小时有些长了)。2。此步删除。 3,孵育一抗(cellsignaling,单克隆抗体),一抗用5%的脱脂奶粉稀释,比例是1:1000(说明书上标示)。放在...
1)转膜条件:4度,湿转,恒压70v,30min-3h;对于小分子,转膜时间适当减少,并用0.22um膜;对于大分子,转膜时间延长至3h,转膜液中可以加入0.1%SDS且甲醇的浓度减少到5%-10%; 2)封闭:5% 脱脂奶粉/TBST,室温,1h,脱脂牛奶相比BSA具有更好的封闭效果; 3) 洗膜:1xTBST,5min,3次; 4)一抗稀释液和稀释比例参考说...
脱脂奶粉,其中 TBST 最后那个 T 是Tween 吗,浓度多大? 答:是 Tween,配方如下:Tris-BufferedSalineTween-20(TBST),NaCl:8g,Trisbase:2.42g 加水 800ml 溶解,加 500-1000ul 的 Tween-20,用 HCl 调节 pH 至 7.4,加水定容至 1L。 50.封闭,一抗,二抗时的温度 ...
3.转膜推荐使用NC膜,对于不同分子量的蛋白,转膜缓冲液的成分和转膜时间可做相应调整。4.封闭推荐用5%脱脂奶粉配置在1*TBST里,若是荧光WB,封闭液里不加 Tween20。 5.抗体孵育与检测,一定要选择如CST这般严格筛选的特异性、灵敏度、可重复性等都表现优异的抗体才能帮助老师得到可靠的结果。
荧光法：含5% 脱脂奶粉的TBS，脱脂奶粉需选择实验室级别的。最后再用TBST润洗封闭后的NC膜3次，每次5 ...
6、封闭用的脱脂牛奶，用前配好，用滤纸过滤后才可用，否则会造成条带表面污浊。7、敷一抗时，将条...
洗抗体通常会使用抗体去除剂来进行操作,这样通常可以重复利用膜3-5次。抗体去除剂通常有中性,酸性,碱性,要根据自己的目的来进行选择,官网通常就有。 如果我想用5%的脱脂奶粉来配制一抗和二抗,但由于担心不好保存怎么办? 答:如果要用奶粉来配制抗体,通常会加入叠氮化钠。实验室配制的叠氮钠是10%的储备液,常温放置...