试剂配制(转膜开始之后就可以配) 1XPBST(0.02%):1L PBS+2mL Tween 20,充分混匀后室温存放; 5%的脱脂奶粉(现配现用):称量2.5g脱脂奶粉到1XPBST中,充分涡旋混匀,4℃保存备用; 封闭:取出转膜成功的PVDF膜,放置于5%脱脂奶粉中,室温摇床封闭1h; (封闭的作用:用大分子物质封闭非相关的蛋白结合位点,降低抗体与膜...
【5】我把你的步骤改了一下。供参考。 1,半封闭(5%的脱脂奶粉)4小时,室温下摇床上展开。(表明:半封闭就是很关键的一步,这步必须多话时间。一般来说,2小时也可以的,但是1小时有些长了)。2。此步删除。 3,孵育一抗(cellsignaling,单克隆抗体),一抗用5%的脱脂奶粉稀释,比例是1:1000(说明书上标示)。放在...
4.封闭推荐用5%脱脂奶粉配置在1*TBST里,若是荧光WB,封闭液里不加 Tween20。 5.抗体孵育与检测,一定要选择如CST这般严格筛选的特异性、灵敏度、可重复性等都表现优异的抗体才能帮助老师得到可靠的结果。 我们有这样一款试剂盒,包含做WB的所有试剂,一站式解决方案,帮助老师快速建立起实验室WB体系,或帮助老师快速排...
可以调整电极和加样;封闭物用量不足,可以提高封闭物浓度,孵育时保证封闭液完全浸没转印膜;封闭物使用不当,比如检测生物素标记的蛋白时不可用脱脂奶粉封闭;封闭时间不够,一般情况下室温37度封闭1小时以上或者4度封闭过夜;7)抗体非特异性结合,可以降低抗体浓度,减少孵育时间8)一抗稀释度不...
2)封闭:5% 脱脂奶粉/TBST,室温,1h,脱脂牛奶相比BSA具有更好的封闭效果; 3) 洗膜:1xTBST,5min,3次; 4)一抗稀释液和稀释比例参考说明书,二抗稀释液是5% 脱脂奶粉/TBST。 图3 BCL-2在Jurkat细胞中的表达(感谢湖南师范大学邱同学友情提供) 图3是邱同学使用CST BCL-2抗体的结果图,一开始,该同学用#3498 Bc...
荧光法：含5% 脱脂奶粉的TBS，脱脂奶粉需选择实验室级别的。最后再用TBST润洗封闭后的NC膜3次，每次5 ...
洗抗体通常会使用抗体去除剂来进行操作,这样通常可以重复利用膜3-5次。抗体去除剂通常有中性,酸性,碱性,要根据自己的目的来进行选择,官网通常就有。 如果我想用5%的脱脂奶粉来配制一抗和二抗,但由于担心不好保存怎么办? 答:如果要用奶粉来配制抗体,通常会加入叠氮化钠。实验室配制的叠氮钠是10%的储备液,常温放置...
脱脂奶粉,其中 TBST 最后那个 T 是Tween 吗,浓度多大? 答:是 Tween,配方如下:Tris-BufferedSalineTween-20(TBST),NaCl:8g,Trisbase:2.42g 加水 800ml 溶解,加 500-1000ul 的 Tween-20,用 HCl 调节 pH 至 7.4,加水定容至 1L。 50.封闭,一抗,二抗时的温度 ...
一旦电转印结束,我们就开始了封闭的过程,常采用5%、8%的脱脂奶粉或胎牛血清,室温下,摇床孵育膜1h。常规采用奶粉即可,但是做磷酸化蛋白或某些特殊蛋白时必须使用胎牛血清封闭,因为奶粉中含有大量酪氨酸,可使磷酸化蛋白的条带变浅,甚至消失,同时也可能出现较高背景。