蛋白印迹(Western blotting,WB) ,也称Western,Western blot、Western blotting、Western印迹,是检测蛋白的重要方法之一。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗...
免疫印迹（WB）实验 免疫印迹实验，亦被称为Western Blotting，是分子生物学、生物化学以及免疫遗传学领域中常用的一种实验技术。这一方法融合了SDS-PAGE的高分辨力与固相免疫测定的高特异性和高敏感性，从而成为蛋白分析中的一项常规手段。其检测原理在于利用特异性抗体对经过凝胶电泳处理的细胞或生物组织样品进行染色，...
蛋白质免疫印迹法(WesternBlot),简称WB,是指通过SDS-PAGE胶将不同分子量的蛋白质分离开,然后将目标蛋白转移到载体(PVDF)膜上,利用抗原抗体的特异性结合,用特异性的一抗结合目标蛋白,用HRP标记的二抗结合一抗,再加以ECL发光液显色,检测组织或者细胞内某种或者某些特异性蛋白质的表达。蛋白质免疫印迹是做蛋白质分析...
使用BCA蛋白定量试剂盒，根据说明书操作来检测标准品和样品的吸光值。通过曲线拟合来计算出样品蛋白浓度。测好后，加入loading buffer进行煮样，使蛋白变性，准备进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。03 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳这一步骤将在下一节详细介绍，它是WB过程中不可或缺的一环。凝胶配制是WB实验的关键步骤之一。具体...
实验步骤 1.准备样品，进行SDS-PAGE 聚丙烯酰胺凝胶电泳，电泳后不要染色，直接进行转膜。2.转膜：转一张膜需准备 6 张 7.0～8.3 cm 的滤纸和 1 张 7.3～8.6 cm 的硝酸纤维素膜。将切好的硝酸纤维素膜置于转膜液中浸 20 min才可使用。在加有转移液的搪瓷盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、一支...
WB蛋白免疫印迹常见问题与解决方案 案例1：膜上一片空白 膜上一片空白 原因-1. 膜上根本没有蛋白：获取样本后，蛋白提取失败且未进行蛋白浓度检测。处理方法：使用BCA法、Folin酚法、Bradford法等方法进行样本蛋白浓度检测，保证样本提取成功。原因-2. 样本中不表达目标蛋白：对样本中蛋白表达情况并不是很熟悉，可能...
WB即Western Blot,蛋白质免疫印迹。是一种基于抗原抗体的特异性结合,半定量检测样品中某种蛋白的技术。作为分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种经典实验方法,WB虽看似简单,却常因各种因素做不出好看的结果图,甚至拿不到结果。今天,小翌就带领大家从头开始,一整个过一遍超详细的实验流程,保管你一学就会,结...
细胞或组织裂解:使用裂解液(如RIPA裂解液)裂解细胞或组织。可以使用超声破碎或手持式研磨仪,将组织研磨至均匀液体,尽量在冰上进行操作,确保蛋白处于可溶解状态。 强RIPA裂解液:适用于难以裂解的样本,如组织样本或需要提取膜蛋白和核蛋白的情况。 弱RIPA裂解液:适用于提取细胞中的全蛋白,特别是当不希望破坏细胞内部的...
免疫印迹,又被称为蛋白质印迹(Western blot,WB),是一种复合性的免疫学检测技术。该方法通过利用SDS-PAGE技术,在生物样本中将蛋白质分子根据其分子量在凝胶上进行分离,随后通过电转移的方式将这些蛋白质转移到固相膜上。固相膜上的蛋白质充当抗原,与相应的抗体发生免疫反应,接着与酶标记的第二抗体发生反应。最终,通...
Western Blot即蛋白免疫印迹，行话常常将其称为WB,是将细胞或组织总蛋白质通过电泳从凝胶转移到固相支持物NC膜（硝酸纤维素薄膜）或PVDF（聚偏二氟乙烯膜）膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的技术。该技术中被检测的特定抗原指目的蛋白。特异性抗体指一抗和二抗（二抗是指一抗的抗体，如一抗是从兔中获得的，...