和bamhi内切酶为酶切位点,将萱草pds特异性核苷酸片段和trv 2质粒进行双酶切,胶回收纯化后用t4连接酶过夜连接,再将连接产物转化大肠杆菌中扩繁,提取重组质粒,进行双酶切和测序验证,将成功连接pds的trv2命名为trv2-pds重组质粒。 28.具体实施方式三:本实施方式萱草pds基因vigs沉默体系在鉴定萱草pds基因中的应用。 29...
1、为了解决上述问题,本发明提供了地梢瓜 ctpds基因及其vigs病毒载体和沉默方法。本发明发现了地梢瓜八氢番茄红素脱氢酶的氨基酸序列及其编码基因 ctpds的序列,在此基础上,提供了一种沉默 ctpds基因的靶标核酸分子、vigs沉默体系和沉默方法,能够有效降低地梢瓜 ctpds基因的表达水平,并使地梢瓜叶片叶绿素和类胡萝卜...
VIGS PDS 体外转录 摘要 为在小麦上进行VIGS体系的优化,根据GenBank中公布的小麦PDS基因序列(FJ517553.1)设计特异引物,利用RT-PCR技术克隆PDS基因片段,以BSMV:γ-2a为原载体,通过酶切将原载体中的2a基因片段替换为PDS基因片段,构建小麦PDS基因的VIGS重组载体BSMV:γ-PDS。经测序确认,其与GeneBank中登录的小麦PDS基因...
PDS基因VIGS转化体系基因功能病毒诱导的基因沉默(VIGS)是近年来发现的一种转录后基因沉默(PTGS)现象,现已被开发为快速鉴定植物基因功能的一种反向遗传学新技术.建立桑树VIGS转化体系,为桑树功能基因研究提供有效简便的试验方法.文以丰驰桑(Morus alba)为材料,运用生物信息学方法和RT-PCR技术,选取同源性较高的片段设计...
辣椒花器官发育以丹基因和PDS基因VIGS载体的构建及鉴定
本发明涉及基因工程技术领域,特别是涉及地梢瓜CtPDS基因及其VIGS病毒载体和沉默方法。本发明提供了一种地梢瓜的八氢番茄红素脱氢酶,氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明发现了地梢瓜八氢番茄红素脱氢酶的氨基酸序列及其编码基因CtPDS的序列,在此基础上,提供了一种沉默CtPDS基因的靶标核酸分子、VIGS沉默体系和沉默...
本发明提供一种优化的鉴定月季RhPDS基因的VIGS沉默体系的方法,包括如下步骤:1)构建重组病毒质粒pTRV2‑RhPDS;2)制备侵染液;3)使用高压喷枪法和真空渗透法分别侵染月季植株、月季扦插苗和已经生根月季组培苗,后续并检测基因沉默效率;4)从沉默植株的数量效率、植株出现白化时间、RhPDS基因的相对表达量三个方面进行分析...
摘要: 本发明公开一种鉴定紫花苜蓿MsPDS基因的VIGS沉默体系,应用及鉴定方法,涉及生物技术领域,所述VIGS沉默体系具有如SEQ ID NO.1所示的基因序列,是利用加入了酶切位点的特异性引物扩增的紫花苜蓿cDNA片段及VIGS病毒载体进行重组后得到.本发明构建的沉默体系不但可以在植株内发生繁殖传播,而且沉默效果显著....
Tab.1 PCR primers of SBEⅡb and PDS genes partial sequences 1.2.3 S EⅡb:PDS 基因的VIGS 重组载体构建 用限制性内切酶 PacⅠ/NotⅠ双切 pM 19-SB Ⅱb:P S,回收 化 SB Ⅱb:P S 基因片段。 同时用 PacⅠ/NotⅠ酶切 BSMV:γ-P S 载体,回收 化大片 段BSMV:γ。然后将回收 SB Ⅱb:P...
【结论】该VIGS 体系的构建，可用于对枸杞部分基因功能的快速初步鉴定和筛选，旨在提高枸杞基因功能研究的效率。关键词：枸杞；八氢番茄红素脱饱和酶基因（PDS ）；病毒诱导基因沉默（VIGS）；本氏烟 中图分类号：S567.19文献标识码：A 文章编号：1002-204X （2021）02-0025-06 doi:10.3969/j.issn.1002-204x...