首先在NCBI在线软件ORF finder(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/orffinder/)分析基因的开放阅读框(open reading frame,ORF)和翻译出的蛋白序列;通过NCBI数据库的在线软件blast(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/)寻找与LjPDS蛋白序列相似的其他物种的PDS蛋白序列并下载;DNAMAN 6...
一般情况下,高温环境会导致植物体内病毒含量显著降低,基因沉默的效率亦明显降低;而在较低的温度条件下,病毒的含量和基因沉默的效率都显著地上升。 vigs体系中的PDS是什么? 八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase,PDS)是类胡萝卜素合成途径中的一个关键酶,当PDS 表达受阻时,植物便丧失了类胡萝卜素的光保护作用,从...
2018年,Zhou等[53]利用TRV作为病毒载体,沉默了加利福尼亚罂粟中的PDS、ZDS、βOH和ZEP基因,使总色素浓度降低了75%～90%,并成功改变了花瓣的颜色,研究了花瓣类胡萝卜素代谢物的分布。2019年,Schachtsiek等[54]通过CLCrV-VIGS系统成功沉默了大麻中的Ch...
vigs体系中的PDS是什么? 八氢番茄红素脱氢酶(Phytoene desaturase,PDS)是类胡萝卜素合成途径中的一个关键酶,当PDS 表达受阻时,植物便丧失了类胡萝卜素的光保护作用,从而呈现出白化效应。也常以此作为接毒成功与否的参照。 展望 VIGS作为快速表征感兴趣基因表型的筛选技术,对特定物种病毒载体的改造应该值得被重视。
2019年,Schachtsiek等[54]通过CLCrV-VIGS系统成功沉默了大麻中的ChlI和PDS基因,形成光漂白表型,并且分别伴随着叶绿素a和类胡萝卜素含量的降低。可以想象,VIGS系统也将被广泛应用于中草药的药理研究。 4影响VIGS效率的因素 4.1 环境因素 环境对于病毒在植物中的复制和扩散有着重要的影响,因此也会影响病毒诱导的基因...
各委托单位正在对目的基因的沉默效率和表型变化进行进一步深入研究。 图1 中国春小麦VIGS实验组与对照组 图2 PDS基因沉默指示组 图3 PDS系统性沉默白化表型
3.4qRT-PCR检测PDS基因沉默效果 利用农杆菌将pCMV201-2bN81:LjPDS载体侵染忍冬幼苗叶片,发现当忍冬植株PDS基因被沉默后,植株叶片出现褪绿,白化表型,而阴性对照植株(侵染空载体)表型则没有变化(图5),初步说明VIGS载体构建成功。 为进一步确定PDS基因的沉默效率,本研究采用qRT-PCR技术检测PDS基因的表达量。结果表明,与...
14.1、本发明首次通过成功构建萱草pds基因vigs沉默体系,获得了具有能够使萱草pds基因沉默的体系。 15.2、本发明采用烟草脆裂病毒构建萱草pds基因沉默体系,能够在萱草植株内进行系统扩散并表达。 16.3、本发明所述沉默体系浸染萱草,尤其是通过注射萱草幼苗的胚乳,能使病毒侵染液被萱草更加充分地吸收,从而高效降低萱草pds基因...
病毒介导的基因沉默（VIGS）机制是一种强大的基因功能研究工具，通过病毒侵染植物并引发转录后基因沉默（PTGS）或转录水平的基因沉默（TGS），以研究植物对病毒的防御反应及基因功能调控。本文概述了VIGS的发展历程，其效率受多种因素影响，如靶基因与插入片段的同源性、片段长度、插入方向和环境温度，以及PDS...
棉花、烟草、番茄(从左至右)分别VIGS沉默PDS/SU基因后叶片系统性白化/黄化 优点: 1.VIGS技术在当代植株上直接产生RNAi效果,大幅节约时间和成本; 2.避免传统转基因体系的弊端,尤其适合转化体系不成熟的植物或受基因型限制的品种; 3.VIGS技术可以同时实现多个基因的沉默; ...