PCR 技术因其高灵敏度在分子实验中广泛应用，但在操作过程中易形成核酸气溶胶污染，微量的污染即可造成假阳性的检测结果，令科研人员头痛不已。UDG 酶能够有效地促使单链或者双链 DNA 里尿嘧啶碱基与糖磷酸骨架之间的 N- 糖苷键发生水解反应，当 UDG 酶和 dUTP 共同使用时，UDG 酶可特异性识别并降解含 dU 的 P...
美国科学家Lindahl最早在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中发现了UDG酶(Uracil DNA Glycosylase,尿嘧啶DNA糖基化酶),UDG酶与dUTP搭配使用,可建立PCR防污染体系,保证PCR扩增结果的准确性。 UDG酶可有效催化水解单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键,但对RNA无活性。使用UDG酶时,以dUTP取代dTTP进行PCR扩增,在P...
美国科学家Lindahl最早在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中发现了UDG酶(Uracil DNA Glycosylase,尿嘧啶DNA糖基化酶),UDG酶与dUTP搭配使用,可建立PCR防污染体系,保证PCR扩增结果的准确性。 UDG酶可有效催化水解单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键,但对RNA无活性。使用UDG酶时,以dUTP取代dTTP进行PCR扩增,在P...
PCR 技术因其高灵敏度在分子实验中广泛应用,但在操作过程中易形成核酸气溶胶污染,微量的污染即可造成假阳性的检测结果,令科研人员头痛不已。 UDG 酶能够有效地促使单链或者双链 DNA 里尿嘧啶碱基与糖磷酸骨架之间的 N- 糖苷键发生水解反应,当 UDG 酶和 dUTP 共同使用时,UDG 酶可特异性识别并降解含 dU 的 PCR...
操作环境中的气溶胶污染是造成PCR结果假阳性最常见的因素,美国科学家Lindahl最早在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中发现了UDG酶(Uracil DNA Glycosylase,尿嘧啶DNA糖基化酶),UDG酶与dUTP搭配使用,可建立PCR防污染体系。 图1. dUTP/UDG酶防污染系统去除残留扩增污染物示意图 ...
使用方法包括调整dUTP终浓度，选择性掺入dTTP，添加适量热敏UDG酶（1个单位）进行25℃~37℃、2~10 min的保温步骤活化UDG酶活性，然后正常进行后续PCR程序。热敏UDG酶适用于去除单链或双链DNA中的尿嘧啶碱基，对RNA无活性，可用于去除PCR残留污染，消除假阳性结果。它适用于PCR、qPCR、RT-qPCR等反应，...
其作用原理是:在PCR体系中加入UDG酶,用dUTP替代dTTP,因此PCR产物中会掺入大量dU。在开始扩增之前,设置污染消化程序,UDG酶可特异性识别并降解含dU的PCR产物,从而阻止DNA聚合酶的延伸,使得残留的含dU的PCR产物无法被扩增,达到消除残留PCR产物污染的目的。
dUTP/UDG酶是作为PCR反应体系的配制成分发挥防污染作用的。PCR反应前，在25-37℃、2-5min的条件下，UDG酶催化水解含有dU-DNA链中的尿嘧啶碱基和糖磷酸骨架的N-糖苷键，产生缺嘧啶位点，释放游离尿嘧啶。然后进行95℃、2 min热处理，使UDG酶失活。同时，高温使得缺嘧啶位点的磷酸骨架极易水解断裂，从而消除含有尿...
热敏UDG酶在PCR实验室防污染中的作用原理 由正常碱基A、T、G、C构成的正常DNA，可以通过PCR反应，用dUTP代替传统的dTTP，扩增出大量含有尿嘧啶的DNA ( U-DNA )，是热敏尿嘧啶-DNA糖基化酶的有效底物；当扩增产物作为残留污染物时，它能通过UDG酶的水解作用，产生脱嘧啶嘌呤位点，该位点当进行PCR预变性时，DNA链...
使用UDG酶时,以dUTP取代dTTP进行PCR扩增,在PCR反应开始前,UDG酶能降解含尿嘧啶的PCR产物,消除PCR残余污染。其作用日益受到重视和肯定。 卫生部曾明确规定,凡是用于临床检验的PCR试剂,都应该有UDG酶技术,以防止污染。 UDG酶的作用原理 由正常碱基A、T、G、C构成的正常DNA,可以通过PCR反应,用dUTP部分或全部替换传统...