首先,培养THP-1细胞,并使用诱导剂如Phorbol 12-myristate 13-acetate(PMA)进行极化。通常使用50 ng/mL或100 ng/mL的PMA处理24-48小时,以诱导THP-1细胞分化为巨噬细胞。 处理后,移除PMA,并用新鲜培养基孵育24小时,让细胞恢复并达到M0状态。形态变化: 单核细胞THP-1在PMA诱导后,从悬浮式生长变为贴壁生长。细胞...
THP-1细胞培养 THP-1是人急性单核细胞白血病细胞,是单核-巨噬细胞相关研究中的常用细胞系工具,可通过PMA(佛波酯)诱导分化为M0型巨噬细胞,然后根据实验需求进一步诱导为M1或M2型巨噬细胞。 细胞形态:悬浮细胞,圆形,大小均一,小而透亮(下图Fig1来自ATCC网站)。 注意:显微镜下观察之前,可以轻轻晃动培养瓶或孔板,静...
1. THP-1细胞诱导成M0型巨噬细胞 培养THP-1细胞:将THP-1细胞置于含有10%胎牛血清(FBS)的RPMI-1640培养基中,细胞密度控制在1×10^6 cells/mL左右。 PMA诱导:加入100 nM的佛波酯(PMA, Phorbol 12-myristate 13-acetate),刺激24-48小时,使THP-1细胞贴壁并分化为M0型巨噬细胞。 洗涤:用PBS缓冲液轻轻洗涤细...
THP-1 的诱导分化 THP-1 是体外研究原代人巨噬细胞功能中使用最广泛的细胞系。原因是在使用 PMA 分化 THP-1细胞后，它们获得了一种类似巨噬细胞的表型，该表型在许多方面类似于原代人巨噬细胞（M0 巨噬细胞）。PMA 是蛋白激酶 C （PKC） 的有效激活剂，而PKC 是巨噬细胞分化的关键调节因子。当 PMA 添加到...
THP-1细胞向M0巨噬细胞的分化 1.PMA诱导:通常使用佛波酯(PMA)将THP-1单核细胞分化为巨噬细胞样细胞。常用方法是将THP-1细胞与150 nM的PMA孵育24小时。之后,将细胞在RPMI培养基中继续培养24小时,以使其稳定并成熟为M0巨噬细胞。2.细胞培养条件:在含10%胎牛血清、10 mM Hepes、1 mM丙酮酸盐和50 µM β...
诱导完M0之后,我会进行不同药物的干预实验。不过要注意,后续使用的培养基里不能含有PMA哦。至于M1和M2的实验,我暂时还没经验,但可以参考一些文献,比如《Optimization of differentiation and transcriptomic profile of THP-1 cells into macrophage by PMA》和《Standardized protocols for differentiation of THP-1 cel...
(1)THP-1用185ng/ml佛波酯(PMA,用DMSO溶解)作用6小时,诱导细胞分化为巨噬细胞(M0)。 (2)在PMA继续存在的情况下,通过分别: •与IFN-γ(20 ng/ml)和LPS(100 ng/ml)孵育48小时以上,使其向M1表型极化。 •与IL-4(20 ng/ml)和IL-13(20 ng/ml)孵育48小时以上,使其向M2表型极化。 (3)极化完成...
下图演示了如何将单核细胞分化为 M0/M1/M2 巨噬细胞。 (A)图是细胞表型变化的相差显微镜图像。可见,用200ng/mL PMA刺激 72小时后,悬浮的 THP-1 单核细胞分化为 M0 巨噬细胞,粘附在细胞壁上,并有伸展的突起。接着,再用20ng/mL IFN-γ和 100ng/mL LPS(诱导向M1分化) 或20ng/mL IL-4(诱导向M2分化...
THP-1 是体外研究原代人巨噬细胞功能中使用最广泛的细胞系。原因是在使用PMA分化 THP-1细胞后,它们获得了一种类似巨噬细胞的表型,该表型在许多方面类似于原代人巨噬细胞(M0 巨噬细胞)。PMA 是蛋白激酶 C(PKC) 的有效激活剂,而PKC 是巨噬细胞分化的关键调节因子。
THP-1细胞系是一种人类白血病衍生的单核细胞系,广泛用于研究人类原代巨噬细胞功能。这个细胞系是非贴壁的,可以在体外分化成巨噬细胞和树突状细胞。为了诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞,通常使用佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸(PMA)。我们实验室使用的PMA浓度为100ng/ml,诱导24~48小时后可以获得M0型巨噬细胞。诱导...