(1)用10%DMSO:900ul FBS 100ul DMSO (有毒小心操作)或直接用无血清细胞冻存液。 (2)收集生长状态较好的细胞于15 mL离心管中,一般细胞数目为5×10^6-10^7/ml,700-800 rpm离心5 min,在超净工作台中用枪头尽量去掉上清。 (3)加入1 mL冻存液,轻轻吹匀。将细胞放入梯度降温盒中,放入-80℃培养箱中几...
(1)用10%DMSO:900ul FBS + 100ul DMSO (有毒小心操作)或直接用无血清细胞冻存液。 (2)收集生长状态较好的细胞于15 mL离心管中,一般细胞数目为5×10^6-10^7/ml,700-800 rpm离心5 min,在超净工作台中用枪头尽量去掉上清。 (3)加入1 mL冻存液,轻轻吹匀。将细胞放入梯度降温盒中,放入-80℃培养箱中...
(1)用10%DMSO:900ul FBS + 100ul DMSO (有毒小心操作)或直接用无血清细胞冻存液。 (2)收集生长状态较好的细胞于15 mL离心管中,一般细胞数目为5×10^6-10^7/ml,700-800 rpm离心5 min,在超净工作台中用枪头尽量去掉上清。 (3)加入1 mL冻存液,轻轻吹匀。将细胞放入梯度降温盒中,放入-80℃培养箱中...
推荐冻存液配方：90%FBS+10%DMSO；冻存密度200-300万细胞/mL/管。Tips：冻存密度过低将导致复苏后状态不佳。4. 将细胞悬液转移至离心管中1000rpm，3min离心收集细胞；5. 离心完成后弃上清，加入相应量的配置好的冻存液轻轻重悬混匀细胞，将细胞悬液分装至冻存管中。注意吹打力度，不要产生过多气泡；Tips...
推荐冻存液配方:90%FBS+10%DMSO;冻存密度200-300万细胞/mL/管。 Tips:冻存密度过低将导致复苏后状态不佳。 4. 将细胞悬液转移至离心管中1000rpm,3min离心收集细胞; 5. 离心完成后弃上清,加入相应量的配置好的冻存液轻轻重悬混匀细胞,将细胞悬液分装至冻存管中。注意吹打力度,不要产生过多气泡; Tips:...
THP-1是人外周血的单核细胞系，最初来源于急性单核细胞性白血病患者。属于悬浮细胞，适合用于转染或感染实验。其表面抗原HLA型为：A2，A9，B5，DRw1，DRw2。工具/原料 培养基：RPMI-1640 (Invitrogen #11875-093)胎牛血清：Fetal Bovine Serum (FBS, GIBCO #10099-141)二甲亚砜：DMSO (SIGMA D2650)双抗P/...
Tips:加入冻存液混匀细胞后及时分装并将细胞降温冻存,以减少DMSO对细胞的毒性。 6. 将细胞放置程序降温冻存盒中,再将冻存盒转移至-80℃冰箱进行降温冻存。 7. 次日复苏一管检查冻存效果,确认没问题后及时将冻存细胞放置液氮中保存,细胞在-80℃冰箱放置时间不要超过3天。
细胞冻存:取差不多1x10^7个细胞,用1ml含有10%DMSO的FBS重悬,转入冻存管,于-80℃冰箱过夜。第二天移入液氮中长期保存。 注意事项 · 细胞养不好,可能的原因有,THP-1细胞特别依赖细胞浓度,ATCC上10 5到106每ML,是一个很高的密度,细胞少了就不太容易养好。
细胞冰封保存：</储备细胞时，1x107个细胞在1ml含10% DMSO的FBS中均匀重悬，随后冷藏在-80℃冰箱过夜，再转入液氮中长期保鲜。贴心提示</ THP-1的生存环境要求严谨，细胞密度至关重要，过低可能导致养分不足。一般来说，105到106每ML的密度对细胞生长最有利。选择源头细胞至关重要，ATCC的THP-1细胞...
用185ng/ml佛波酯(PMA,用DMSO溶解)作用6小时,诱导细胞分化为巨噬细胞。然后,在PMA继续存在的情况下,通过分别: •与IFN-γ(20 ng/ml)和LPS(100 ng/ml)孵育48小时以上,使其向M1极化。•与IL-4(20 ng/ml)和IL-13(20 ng/ml)孵育48小时以上,使其向M2表型极化。