我试过很多次,即使没有做细胞计数,只要THP1细胞状态好,低密度也能成功感染。 去除死细胞 🧪 转染后,死细胞和正常细胞在显微镜下很好区分。正常细胞圆滚滚的透亮透亮的,而死细胞则是很小的点状细胞。如果转染后细胞死很多,可能和转染前细胞状态不佳有很大关系。另外,病毒的质量也很关键。转染后细胞会变成小点状,...
1. FNDC5过表达慢病毒载体的构建PCR产物经测序验证，结果显示成功扩增并构建了FNDC5过表达慢病毒载体。载体在DH5α感受态细胞中扩增后，测序结果与预期一致，表明构建成功。2. 慢病毒颗粒的包装与滴度测定转染293T细胞后，可观察到绿色荧光表达，表明慢病毒颗粒成功包装。经测定，病毒滴度为1.32×10^9 TU/mL，满足...
目前实验中THP-1转染使用较多的方法是：脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染，其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些，但操作更繁琐、成本也更高。● 脂质体转染成本低廉，但细胞毒性较大，细胞死亡率较高；● 腺病毒转染可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平，但可能对细胞免疫状态影响大；● 慢病毒转染细胞毒...
第一步,LentiCas9慢病毒感染,让WT THP-1表达Cas9蛋白,通过Blasticidin(BSD)加压筛选;第二步,LentiGuide慢病毒感染,让THP-1(表达Cas9)表达sgRNA,通过Puromycin(Puro)加压筛选,从而得到目的基因敲除的THP-1 KO细胞株。 2.实验结果:得到表达Cas9的THP-1工具株;得到目的基因敲除的THP-1 KO细胞株。如果想要得到目的基因...
目前实验中THP-1转染使用较多的方法是:脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染,其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些,但操作更繁琐、成本也更高。 脂质体转染成本低廉,但细胞毒性较大,细胞死亡率较高; 腺病毒转染可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大; 慢病毒转染细胞毒性低,但其病...
目前实验中THP-1转染使用较多的方法是:脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染,其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些,但操作更繁琐、成本也更高。 脂质体转染成本低廉,但细胞毒性较大,细胞死亡率较高; 腺病毒转染可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大; 慢病毒转染细胞毒性低,但其病...
THP-1细胞因其特性,本身就很难转染,所以转染效率普遍偏低。但转染效率太低容易影响后续实验的进行,那么我们可以如何提高转染效率呢? 目前实验中THP-1转染使用较多的方法是:脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染,其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些,但操作更繁琐、成本也更高。
THP-1细胞因其特性,本身就很难转染,所以转染效率普遍偏低。但转染效率太低容易影响后续实验的进行,那么我们可以如何提高转染效率呢? 目前实验中THP-1转染使用较多的方法是:脂质体转染、腺病毒转染、慢病毒转染,其中病毒转染效率相较脂质体转染要高一些,但操作更繁琐、成本也更高。
Luciferase THP-1细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。该细胞株性状稳定,培养时不需要添加抗生素维持。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照,也可用于活体动物成像实验。 THP-1细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。 THP-1细胞对乳汁珠和激活的红细胞有吞噬作用,无表面和胞质免疫球蛋白。THP-1细胞可以用佛波醇、TPA诱导...
方法采用腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法分别转染THP-1巨噬细胞,并用荧光显微镜观察细胞转染荧光表达情况,流式细胞仪检测THP-1细胞转染效率,台盼蓝染色检测细胞病死率。结果腺病毒对THP-1巨噬细胞转染效率可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大。MOI=200时,转染效率较低,仅为(29.81...