二、转染方法简介。 1. 脂质体转染法。 这脂质体转染法就像是一个小包裹。脂质体就像是一个脂质做成的小袋子,把要转染的东西包在里面,然后再跟细胞接触。细胞就像是一个小房子,脂质体这个小包裹就想办法把东西送到房子里去。这个方法操作起来相对简单,不需要啥特别复杂的仪器,实验室里比较常用。不过呢,它有时候...
1. 准备细胞：确保THP-1细胞处于良好生长状态，并对其进行适当的分化诱导。2. 选择转染方法：根据目的基因大小和特性选择合适的转染方法，如电穿孔法、脂质体转染等。3. 制备转染试剂：按照所选方法准备相应的转染试剂和缓冲液。4. 转染操作：将目的基因与细胞混合，通过特定的方法将基因导入细胞内。5. ...
1. 转染效率受转染质粒本身效果影响。瞬时转染宜使用超螺旋DNA；在稳定转染中，细胞对线性DNA的摄取水平低于超螺旋DNA，但它将DNA整合至宿主基因组中的效果更好；2. 一般培养基中加入血清会促进DNA的转染。但脂质体转染和转染RNA时，最好在无血清的情况下进行；3. 在转染之前更换培养基，可提高转染效率，所用培养...
首先，确保细胞状态适宜，转染前一天，将细胞接种在每孔500微升无抗生素的培养基中，让细胞密度达到30-40%。其次，为siRNA和RFectSP的混合物做准备：取6 pmol siRNA用50微升无血清培养基稀释，然后取2微升RFectSP用同样量的无血清培养基稀释。轻轻混合后，在室温下静置5分钟。务必在25分钟内完成下一步...
核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照 1:1 关系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混匀,室温静 止 10-15 分钟。 在细胞培养基中加入核酸复合物:根据参考用量在细胞中加入核酸复合物,并轻轻混匀;细胞培养基 里面可以含有血清。 细胞换液:转染 24 小时后对细胞进行正常换液,悬浮细胞转染过程中不用换液。
注意:本细胞转染用量条件不适合lipo使用。 二、THP-1高效转染试剂使用说明: 1.提前1天接种细胞:细胞汇合度在60-80%左右,再进行转染。 2. 核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照比例关系直接混合,用移液器吹打、混匀,室温静止15分钟。 3.在细胞培养基中加入核酸复合物:根据参考用量在细胞中加入核酸复合物,并轻轻...
使用Entranster-E电转液与Amaxa Nucleofector进行电穿孔时THP-1细胞的推荐程序设置(0.2 cm电转杯中100μl电穿液) 程序设置为V-001,DNA用量为2μg,细胞密度为10x10^6 cells/ml
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时THP-1细胞的电转染条件是: 对于0.2 cm电转杯,细胞密度为10x10^6 cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为140V, 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯,…
方法采用腺病毒,慢病毒,脂质体2000三种方法分别转染THP一1巨噬细胞,并用荧光显微镜观察细胞转染荧光表达情况,流式细胞仪检测THP—l 细胞转染效率,台盼蓝染色检测细胞病死率。结果腺病毒对THP一1巨噬细胞转染效率可在对细胞损伤较小的情况下达较高水平,但可能对细胞免疫状态影响大。MOI=200时,转染效率较低,仅为(...
A. 细胞接种:转染前一天接种细胞,每孔 500 μl 培养基(不可360问答加抗生素),使细胞在转染时密度在30-40% 。B. siRNA-RFectSP权混合物准备:1. 6pmol si罗裂婷联航轮财谓RNA 用50μl无血清培养基稀释。2. 2μl RFectSP用50μl无血清培养基稀释。轻轻混匀,室温孵育5min。注意:确保在25 min内执行第...