在研究过程中,需要对THP-1细胞进行电转染,以实现外源基因的转染和表达。下面将介绍一种常用的THP-1细胞电转方法。 1. 购买所需试剂和试验器材:首先需要购买所需的试剂和试验器材,包括电转剂、细胞培养基、完整培养基、含抗生素的培养基、细胞培养器具(离心管、移液器、离心机等)等。 2. 预处理THP-1细胞:将...
3.2 转染:将负载DNA的复合物滴加到THP-1细胞培养基中,轻轻摇动培养皿使复合物均匀分布。 3.3 电转:将培养皿放置于电转仪中进行电转;电转条件一般为电压1500-1800V、电容时间20-30ms。 3.4 处理:将电转后的THP-1细胞培养液转移至含有适当抗生素的培养基中,并培养至目的。 四、结果检测 4.1 抗生素筛选:通过...
这个方法转染效率有时候能比较高,但是对细胞伤害也比较大。就好比强行把门打开把东西塞进去,门可能会有点损坏,细胞也可能会被电得有点不舒服,状态不太好。 3. 病毒载体转染法。 病毒载体转染法就像是找了个小间谍。利用病毒能进入细胞的特性,把我们要转染的东西放在病毒里面,然后让病毒带着这些东西进入细胞。这个...
使用Entranster-E电转液与指数衰减脉冲电转仪时THP-1细胞的电转染条件是: 对于0.2 cm电转杯,细胞密度为10x10^6 cells/ml,DNA用量为2μg,电转液体积为100μl,电压为140V, 电容为950μF。 对于0.4 cm电转杯,…
使用Entranster-E电转液与菜为载指数衰减脉冲电转仪时THP-获够断1细胞的电转染条件是：对于0.2 cm...
答案：进行THP-1细胞转染，即是将外源基因导入THP-1细胞的过程。这涉及到一系列步骤和技术操作，具体方法如下：一、转染流程简述 1. 准备细胞：确保THP-1细胞处于良好生长状态，并对其进行适当的分化诱导。2. 选择转染方法：根据目的基因大小和特性选择合适的转染方法，如电穿孔法、脂质体转染等。3. ...
一、转染材料准备 1. 转染试剂用量:10ul 2. siRNA浓度:20um/L 3. 细胞密度:1*106-1*105 4. 转染用培养板:6孔板 5.转染试剂:Advanced DNA RNA转染试剂;货号:AD600150 6. 转染时间:48小时 7.细胞培养胎牛血清:Z7180FBS-500超低内毒素胎牛血清 ...
使用Entranster-E电转液与Amaxa Nucleofector进行电穿孔时THP-1细胞的推荐程序设置(0.2 cm电转杯中100μl电穿液) 程序设置为V-001,DNA用量为2μg,细胞密度为10x10^6 cells/ml
由于THP-1细胞是悬浮培养,所以对很多病毒的转染效率不高,所以电转是理想的选择。依据这个细胞的特性,海星生物优化了其中的电转的缓冲液,加入了吸附剂,可以大大促进DNA吸附到细胞的表面,同时还加大的缓冲液的电阻,从而可以提供电转的电压,从而大幅度的提升了电转的效率,是传统缓冲系统的3-5倍的效率,达到80%。同时...
转染时间:48小时 血清:Z7180FBS-500超低内毒素胎牛血清 细胞冻存:CE70100T无血清细胞冻存液 细胞活检测:K009-500,CCK8 二、操作步骤 提前1 天接种细胞:细胞汇合度在 60-80%左右,再进行转染。 核酸复合物制备:将核酸与转染试剂按照 1:1 关系直接混合,用移液器吹吸 10-15 次混匀,室温静 止 10-15 ...