THP-1细胞为悬浮细胞且具有低密度依赖性,一般超过10^6/ml传代,比例一般为1:3/1:4,因此目前利用的两种传代方式: (1)半换液传代(不用离心):吸取培养瓶或者培养皿中的细胞移至新的培养瓶或者培养皿中,补足培养基2-3ml。 (2)传统的离心传代:将瓶子或皿中的细胞吸取至15mL离心管中,700-800rpm,离心5min;弃...
若培养基中不添加β-巯基乙醇，长期培养细胞可能会出现大量贴壁，严重聚团等情况。THP-1 细 胞 换 液 方 法 离心换液法：1. 准备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等；（培养基提前预热）2. 将所有细胞悬液转移至离心管中；3. 900-1000rpm，3min离心；4. 弃上清，加5mL PBS轻轻重悬细胞进行润洗，...
1.不要打开培养瓶盖,将细胞放入 37℃培养箱中静置 3-4 小时后再做处理,以稳定细胞状态。 2.通过离心的方式收集细胞,然后将细胞沉淀加入5-8ml的完全培养基轻轻吹打均匀后移入新的T25培养瓶中培养。 培养时的注意技巧 换液前将培养瓶竖在培养箱静置1小时左右,轻轻吸掉3ml左右培养基,然后加入3ml的新鲜完全培养...
1. 补液法：培养基变黄时可补加适量（1~2mL）新鲜培养基，补加1-2次之后，用离心的方式全部换液，离心1200rpm （约250g）3分钟。2. 半换液法：以T25瓶子为例，瓶子里装有5mL培养基。竖起瓶子静置一段时间，待细胞沉底（以肉眼观察到沉底为限），小心吸出2.5mL的培养基，转移到离心管，离心1200rpm （约...
1. 预热水浴锅至37℃ 2. 准备一个15mL离心管,加入2-3mL左右完全培养基待用 3. 将细胞从-80℃冰箱或液氮中取出后,放进一次性PE手套中,立即投入水浴锅,迅速用力摇晃管子,使其1分钟内融化 4. 酒精擦拭冻存管,进入生物安全柜,把融化的细胞悬液缓慢滴加到步骤2准备好的离心管中 ...
1.THP-1细胞对冻存温度比较敏感，建议冻存后立即转入-80℃冰箱，长期保存需放置液氮中。2.冻存时细胞活率建议大于90%，每管冻存细胞数至少在2×106~5×106个细胞/ml。常见问题及解决方法 1. 培养过程中细胞碎片过多或者药筛后死细胞过多：图2细胞碎片多且死细胞多 圆形透亮、饱满、不皱缩的细胞是活细胞。...
(1)基础培养基:如果细胞状态不佳,例如进行转染、病毒感染等操作,可尝试使用ATCC改良RPMI 1640(Gibco 货号A1049101,ATCC 货号 30-2001,Absin 货号 abs9468) ,该培养基具有更高的糖分(4.5g/L)、更稳定的pH缓冲体系。 (2)血清:可短期提高至20%。不需要进行热灭活。THP-1对血清要求较高,且因为博主目前在进行慢...
一、培养方法: 1.培养基:使用含有10%胎牛血清(FBS)的RPMI 1640培养基,确保无菌且不含抗生素。 2.细胞接种:以每孔1×10^5个细胞接种到96孔板,在37℃、5%二氧化碳的细胞培养箱中培养。 3.培养时间:通常情况下,每2-3天更换一次培养基,根据细胞生长情况决定传代时间。 4.细胞传代:当细胞达到 80%-90%汇合时...
1. THP-1细胞在偏酸性环境中生长更快，所以当培养基稍微变黄（呈橘红色）时，是适合细胞生长的，此时补液或半换液即可；2. THP-1细胞培养液中需添加β-巯基乙醇（细胞培养级别），若不添加，可能会对细胞状态造成影响；3. THP-1细胞比较难复苏，复苏初期细胞生长缓慢且会有部分细胞破碎，出现黑色细胞碎片，少量...